论文部分内容阅读
新城疫(Newcastledisease,ND)是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)引起的一种急性、高度接触性传染病。曾屡次形成世界范围的大流行,给养禽业造成了巨大的经济损失。近年来,虽然各地采取了积极的防制措施,ND逐渐表现为非典型性,当前已成为危害我国养禽业的一主要病毒性疾病。本研究进行了肉鸡非典型ND的综合诊断及其分离毒融合蛋白基因部分片段的序列分析,以期为肉鸡非典型新城疫的病因学研究提供一定的理论依据。
本研究首先通过临床症状观察、病理学检查、血清学检测及病原分离鉴定对两个疑似患非典型ND的肉鸡群进行了综合诊断。诊断结果表明:两发病鸡群均表现有非典型新城疫的呼吸道症状、消化道症状;病鸡的胃肠道及呼吸道出血性、卡他性炎症等剖检病变均符合ND的病变特征,病毒性脑炎、免疫器官坏死是具有证病意义的ND组织病变;免疫组织化学检测的阳性结果、发病后HI抗体检测结果及NDV的分离鉴定具有证病意义;综合判定两肉鸡群所患疾病为非典型ND。MDT、ICPI等毒力指标测定结果显示从患非典型ND肉鸡分离到的NDV为强毒株。致病性试验结果表明该NDV分离毒对鸡具有高度致病性。
用RT-PCR技术扩增了NDV分离毒HB/1/09/Ck株F基因部分片段。经测序获得其F基因5端部分cDNA。分析测定的序列及由其推导的氨基酸序列,结果表明HB/1/09/Ck株分离毒的F蛋白裂解位点序列为112R-R-Q-K-R-F117,符合典型的NDV强毒株特征;将HB/1/09/Ck株NDVF基因部分核苷酸序列与查阅的21株NDV参考毒株相应序列进行比较,结果表明,其与NDV参考毒株TJ05、Js0104、JS-1-03-Go的同源性最高分别为97.1％-94.9%;与RI-388、Taiwan-95和MZ-3595、Tr-8/97之间同源性较高,分别为91.7%、90.0%和88.3%、88.0%;与其ZA-16/90、QH-2/84、Herts33、H-1072、PB9601、IraqAG68之间同源较低,分别为84.1%-86.5%;与Italien、ULS/67、Aus/32、USA/43084/92、F48Es、LaSota、V4、TexasGB之间同源最低,分别为30.9%-35.4%。以F基因高变区374nt片段(第47-420nt)为基础,用软件绘制遗传发生树,发现HB/1/09/Ck株NDV与TJ05、Js0104、JS-1-03-Go同处1个分支,属于基因Ⅶ型(Ⅶd亚型)。这与近年来NDV在我国的流行特征相符。此外,本研究分离到的NDV与疫苗毒LaSotaF基因核苷酸同源性较低,这可能是肉鸡群接种过LaSota疫苗后仍然发生非典型ND的原因之一。