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目的通过观察小鼠鼻腔黏膜的病理改变并测量基质金属蛋白酶-9含量的变化,探讨变应性鼻炎小鼠在卵清蛋白激发下鼻黏膜的重塑情况及不同剂量的布地奈德鼻喷激素对重塑的作用,同时评估其副作用。
方法42只雌性BALB/c小鼠随机分为7组,A-G组,每组6只,其中B、D、E、F、G组小鼠分别于第0、7、14天予25ug卵清蛋白腹腔注射,间隔7天,第22天至28天每侧鼻孔予1ug卵清蛋白局部激发,每天1次,A组小鼠给予等量生理盐水代替。28天激发完成后,判定造模是否成功,处死A、B组小鼠,留取鼻腔灌洗液及鼻腔组织。第29天起,D-G组小鼠每侧鼻孔予1ug卵清蛋白局部激发,每周2次,C组予等量生理盐水喷鼻,连续12周,同时E、F、G组分别予0.6ug/20g、3.0ug/20g、15ug/20g布地奈德激素喷鼻,每日1次,连续12周,最后1次喷鼻后,记录15min内各组小鼠喷嚏及挠鼻次数,称取体重,处死小鼠,留取鼻腔灌洗液、血浆、鼻腔组织、胸腺组织。ELISA法测定鼻腔灌洗液中基质金属蛋白酶-9及血浆中皮质酮含量,HE染色、PAS及Masson三色胶原染色观察鼻腔黏膜病理改变,测算小鼠胸腺/体重比。使用Image-ProPlus6.0软件对鼻腔组织学改变进行量化分析,SPSS17.0进行统计学分析,分别将A、B、C、D组数据及C、D、E、F、G组数据采用非参数Kruskal-Wallis秩和检验进行整体比较,当有统计学意义时进行两两比较,并用Bonferroni法进行校正。
结果MMP-9含量(ng/ml):C-G组分别为(0.26±0.01)、(2.74±0.21)、(1.21±0.17)、(0.89±0.06)、(0.42±0.02),总体比较χ2=27.88,P<0.001;D组比B组(2.21±0.13)增加,P<0.005;E、F、G组均较D组减少,P均<0.005,且各组间比较,P均<0.005。
嗜酸性粒细胞数目:C-G组分别为(4.50±2.14)、(13.17±2.11)、(4.67±2.81)、(4.33±1.70)、(4.00±1.91),总体比较χ2=14.33,P<0.001。D组比B组(20.5±1.98)减少,P<0.005;E、F、G组均比D组减少,P均<0.005,E、F、G组间无统计学差异。腺体上皮细胞直径(um):C-G组分别为(8.76±0.54)、(18.70±1.74)、(16.35±1.21)、(13.18±1.57)、(8.58±0.74),总体比较χ2=25.85,P<0.001,D组比B组(9.12±1.34)增加,P<0.005;F、G组比D组减少,P<0.005,E组与D组比较,差异无统计学意义。杯状细胞:C-G组分别为(1.50±0.96)、(21.17±4.78)、(18.67±3.68)、(9.33±2.05)、(3.83±1.57),总体比较χ2=26.07,P<0.001,D组比B组(1.33±0.94)增加,P<0.005,F、G组均比D组减少,P<0.005,E组比D组差异无统计学意义。上皮下厚度(um):C-G组分别为(65.35±14.76)、(155.67±17.57)、(144.83±11.79)、(106.92±12.63)、(71.26±12.98),总体比较χ2=25.05,P<0.001,D组比B组(77.20±9.61)增加,P<0.005;F、G组均比D组减少,P<0.005,E组比D组差异无统计学意义。上皮下胶原阳性区域(%):C-G组分别为(13.24±3.46)、(48.43±3.06)、(40.94±4.89)、(20.81±2.80)、(11.50±2.24),总体比较χ2=25.92,P<0.001,D组比B组(11.09±1.87)增加,P<0.005;F、G组比D组减少,P<0.005,E组比D组比较无统计学意义。
皮质酮含量及胸腺/体重比:各组血浆皮质酮含量无统计学差异,C-G组胸腺/体重比分别为(0.29±0.08)、(0.28±0.06)、(0.24±0.03)、(0.23±0.05)、(0.11±0.04),G组比C组减少,P<0.01,E、F组比C组减少,差异均无统计学意义。
结论在连续12周的卵清蛋白局部激发后,变应性鼻炎小鼠鼻腔黏膜发生重塑;增加鼻喷激素的剂量(3ug/20g及15ug/20g)可以抑制鼻腔黏膜重塑的发展;连续12周使用高剂量的鼻喷激素(15ug/20g)可以抑制小鼠的胸腺/体重比,但对血浆皮质酮含量无影响。
方法42只雌性BALB/c小鼠随机分为7组,A-G组,每组6只,其中B、D、E、F、G组小鼠分别于第0、7、14天予25ug卵清蛋白腹腔注射,间隔7天,第22天至28天每侧鼻孔予1ug卵清蛋白局部激发,每天1次,A组小鼠给予等量生理盐水代替。28天激发完成后,判定造模是否成功,处死A、B组小鼠,留取鼻腔灌洗液及鼻腔组织。第29天起,D-G组小鼠每侧鼻孔予1ug卵清蛋白局部激发,每周2次,C组予等量生理盐水喷鼻,连续12周,同时E、F、G组分别予0.6ug/20g、3.0ug/20g、15ug/20g布地奈德激素喷鼻,每日1次,连续12周,最后1次喷鼻后,记录15min内各组小鼠喷嚏及挠鼻次数,称取体重,处死小鼠,留取鼻腔灌洗液、血浆、鼻腔组织、胸腺组织。ELISA法测定鼻腔灌洗液中基质金属蛋白酶-9及血浆中皮质酮含量,HE染色、PAS及Masson三色胶原染色观察鼻腔黏膜病理改变,测算小鼠胸腺/体重比。使用Image-ProPlus6.0软件对鼻腔组织学改变进行量化分析,SPSS17.0进行统计学分析,分别将A、B、C、D组数据及C、D、E、F、G组数据采用非参数Kruskal-Wallis秩和检验进行整体比较,当有统计学意义时进行两两比较,并用Bonferroni法进行校正。
结果MMP-9含量(ng/ml):C-G组分别为(0.26±0.01)、(2.74±0.21)、(1.21±0.17)、(0.89±0.06)、(0.42±0.02),总体比较χ2=27.88,P<0.001;D组比B组(2.21±0.13)增加,P<0.005;E、F、G组均较D组减少,P均<0.005,且各组间比较,P均<0.005。
嗜酸性粒细胞数目:C-G组分别为(4.50±2.14)、(13.17±2.11)、(4.67±2.81)、(4.33±1.70)、(4.00±1.91),总体比较χ2=14.33,P<0.001。D组比B组(20.5±1.98)减少,P<0.005;E、F、G组均比D组减少,P均<0.005,E、F、G组间无统计学差异。腺体上皮细胞直径(um):C-G组分别为(8.76±0.54)、(18.70±1.74)、(16.35±1.21)、(13.18±1.57)、(8.58±0.74),总体比较χ2=25.85,P<0.001,D组比B组(9.12±1.34)增加,P<0.005;F、G组比D组减少,P<0.005,E组与D组比较,差异无统计学意义。杯状细胞:C-G组分别为(1.50±0.96)、(21.17±4.78)、(18.67±3.68)、(9.33±2.05)、(3.83±1.57),总体比较χ2=26.07,P<0.001,D组比B组(1.33±0.94)增加,P<0.005,F、G组均比D组减少,P<0.005,E组比D组差异无统计学意义。上皮下厚度(um):C-G组分别为(65.35±14.76)、(155.67±17.57)、(144.83±11.79)、(106.92±12.63)、(71.26±12.98),总体比较χ2=25.05,P<0.001,D组比B组(77.20±9.61)增加,P<0.005;F、G组均比D组减少,P<0.005,E组比D组差异无统计学意义。上皮下胶原阳性区域(%):C-G组分别为(13.24±3.46)、(48.43±3.06)、(40.94±4.89)、(20.81±2.80)、(11.50±2.24),总体比较χ2=25.92,P<0.001,D组比B组(11.09±1.87)增加,P<0.005;F、G组比D组减少,P<0.005,E组比D组比较无统计学意义。
皮质酮含量及胸腺/体重比:各组血浆皮质酮含量无统计学差异,C-G组胸腺/体重比分别为(0.29±0.08)、(0.28±0.06)、(0.24±0.03)、(0.23±0.05)、(0.11±0.04),G组比C组减少,P<0.01,E、F组比C组减少,差异均无统计学意义。
结论在连续12周的卵清蛋白局部激发后,变应性鼻炎小鼠鼻腔黏膜发生重塑;增加鼻喷激素的剂量(3ug/20g及15ug/20g)可以抑制鼻腔黏膜重塑的发展;连续12周使用高剂量的鼻喷激素(15ug/20g)可以抑制小鼠的胸腺/体重比,但对血浆皮质酮含量无影响。