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实验目的: 冠状动脉粥样硬化性心脏病是一种多因素参与的疾病，发病机制错综复杂。中医对冠心病的认识有悠久的历史，认为本病属中医“胸痹”、“心痛”、“真心痛”等病证范畴。病机为本虚标实，其病因多为胸阳不振、阴寒凝滞等，病变过程中均伴有心血瘀滞，故活血化瘀是治疗本病的常用手段之一。中药复方大都含有芳香走窍之物，可以促进药物的透皮吸收，适合做成经皮给药制剂;巴布剂经皮给药，有载药量大、可以避免胃肠道“首过效应”的优点。 精制冠心方又称冠心Ⅱ号方由丹参、赤芍、川芎、红花和降香5味中药组成，临床上用于淤血内停所致的胸痹，症见胸闷，心前区刺痛，即心血瘀阻之冠心病、心绞痛。精制原方为水提后直接进粒，出膏率高，服用量大，患者依从性较差;近年来，大孔吸附树脂逐步用于中药有效成分和复方制剂的分离纯化。为降低其得膏率，使原有效成分高度富集，方便制剂，课题组采用大孔吸附树脂对冠心全方水提物进行了精制，制备成冠心膏，即精制冠心巴布膏（冠心膏）;本课题采用大鼠血瘀证模型和心肌缺血模型对其活血化瘀作用进行观察;利用LC-MS/MS法测定家兔经透皮给药冠心膏后血浆中丹参酮ⅡA、丹酚酸B和芍药苷的浓度，分析其体内药代动力学参数，以评价冠心膏的体内透皮吸收行为;观察家兔皮肤单次和多次接触冠心膏后的刺激反应情况及豚鼠皮肤重复接触药物后的过敏反应情况，以评价其安全性，为其进一步开发利用提供实验依据。 2.实验方法和结果: 2.1冠心膏的药效学实验研究 2.1.1不同工艺冠心膏对脑垂体后叶素造成大鼠急性心肌缺血的影响 方法:采用iv脑垂体后叶素(0.5U·kg-1)造成大鼠急性心肌缺血模型，观察冠心膏（含生药10.0，5.0，2.5g·kg-1）外用涂抹给药7d对心律失常的发生时间，持续时间及室性心律失常发生率的影响。 结果:冠心膏高剂量降低心律失常的发生率，使心律失常的持续时间缩短，并延迟心律失常的开始时间，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01);中剂量组缩短其持续时间，降低发生率;低剂量组对心律失常的发生没有影响。 2.1.2冠心膏对血瘀证大鼠血液流变性的影响 方法:采用大鼠皮下注射肾上腺素加冰浴的血瘀证模型，观察冠心膏高、中、低3个剂量（含生药10.0，5.0，2.5g·kg-1）外用涂抹给药5d对全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原含量、红细胞压积、血小板聚集的影响。 结果:冠心膏高剂量组减低血浆黏度、血小板聚集率、200s-1切变率下的全血黏度;与模型组比较有显著差异性(P＜0.05)。但对红细胞压积和纤维蛋白原含量均没有影响;低剂量组仅降低10s-1，200s-1切变率下的全血黏度。 2.2冠心膏的药动学实验研究 方法:建立家兔血浆中冠心膏三种主要成分丹参酮ⅡA、丹酚酸B和芍药苷LC-MS/MS测定方法，测定冠心膏经皮给予后三种主要成分丹参酮ⅡA、丹酚酸B和芍药苷的血药浓度，计算药代动力学参数。家兔按15g·kg-1生药经皮给药，LC-LC/MS法测定血浆中上述三种主要成分的浓度，用软件WinNonLin拟合，并计算主要药动学参数。 结果:血浆中丹参酮ⅡA、丹酚酸B、芍药苷分别在1～100μg·L-1，50～1000μg·L-1，10～1000μg·L-1线性关系良好(r＞0.999)，平均回收率分别为96.57％，91.90％，95.93％。日内差异RSD小于15％。家兔透皮给药精制冠心巴布膏后丹参酮ⅡA、丹酚酸B和芍药苷的主要药动学参数分别为:Cmax(20.85±12.68)，(636.25±386.91)，（787.80±395.64)μg·L-1;Tmax(0.49±0.28)，（0.44±0.27），(0.46±0.30)h。 2.3冠心膏的安全性评价研究 2.3.1皮肤对冠心膏的刺激反应 方法:观察家兔皮肤单次和多次给予冠心膏后的刺激反应情况。将赋形剂贴在家兔左侧脱毛区作为对照，冠心膏贴敷家兔右侧脱毛区域（分别为完整皮肤和破损皮肤），贴敷8h/天，去除药物后用温水清洁皮肤，连续贴敷7天，观察对皮肤的刺激强度。 结果:按皮肤刺激反应标准评分，冠心膏单次给药，观察完整皮肤组给药1h后:一只动物双侧勉强可见红斑，可能由于胶带缠绕过紧所致。其他动物及破损皮肤组各时间点均未出现红斑、水肿等刺激反应，完整皮肤组平均积分值为0.25，破损皮肤组平均积分值为0。冠心膏多次给药，完整皮肤组及破损皮肤组动物各时间点均未出现红斑、水肿等刺激反应，完整皮肤组平均积分值为0，破损皮肤组平均积分值为0。 2.3.2皮肤对冠心膏的过敏反应 方法:观察豚鼠皮肤重复接触冠心膏后的过敏反应情况。先将豚鼠作皮肤准备，随机分成三组，赋型剂、冠心膏、阳性对照组(1％的2，4—二硝基氯苯DNCB)0.2mL，分别进行致敏接触、激发接触，观察皮肤过敏反应情况。 结果:冠心膏对豚鼠皮肤过敏试验结果表明，冠心膏未引起动物皮肤过敏反应，而阳性对照药2，4-二硝基氯苯引发豚鼠皮肤出现典型的红斑、水肿等过敏反应表现，0h～48h内致敏发生率为100％。 3.结论: 本实验采用血瘀证模型和心肌缺血模型，研究冠心膏的活血化瘀和抗心律失常的药理作用，结果显示:冠心膏高剂量组能降低血瘀证动物模型的血浆粘度、血小板聚集率以及全血粘度，对大鼠由脑垂体后叶素引起的心律失常有一定的缓解作用;通过对冠心膏的药动学研究，结果显示:LC-MS/MS选择性好，灵敏度高，适用于血浆样品成分含量测定，丹参酮ⅡA、丹酚酸B和芍药苷3种主要成分的药代动力学特征可以评价精制冠心巴布膏的体内透皮吸收行为;采用家兔皮肤单次和多次接触冠心膏后的刺激反应情况和豚鼠皮肤重复接触冠心膏后的过敏反应情况对冠心膏进行安全性评价研究，结果显示:冠心膏对家兔的完整皮肤及破损皮肤没有刺激作用，对豚鼠皮肤不会引起过敏反应。综上所述，提示冠心膏制剂外用可以改善冠心病的一些症状，具有安全性。