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目的：玻连蛋白是乳腺癌细胞外基质中重要组成成分，在乳腺癌细胞的转移中扮演了十分重要的角色。玻连蛋白与乳腺癌细胞上的αⅤβ3整合素结合才能发挥作用，然而血浆中天然玻连蛋白没有结合αⅤβ3整合素的能力。在血栓形成过程中蛋白质二硫键异构酶(Protein disulfide isomerase，PDI)还原玻连蛋白从而促进其与整合素αⅤβ3的结合，基于这一背景，本课题拟研究PDI在玻连蛋白介导乳腺癌转移过程中发挥的作用及其机制。
方法：(1)细胞免疫荧光染色和流式细胞术确认乳腺癌细胞表面存在PDI和αⅤβ3整合素。(2)Westernblot观察被激活的乳腺癌细胞是否向胞外释放PDI。(3)分别用wt-PDI(有活性)与inert-PDI(无活性)处理血浆，免疫荧光染色分析两种处理后的血浆中玻连蛋白与乳腺癌细胞结合的差异。(4)MTT实验检测玻连蛋白对乳腺癌细胞增殖活性的影响，并研究胞外PDI抑制对玻连蛋白作用的影响。(5)划痕实验和Transwell实验观察胞外PDI被抑制后，玻连蛋白诱导乳腺癌细胞迁移能力的变化。(6)WesternBlot探究玻连蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移相关信号通路的影响，以及胞外PDI抑制后相关信号通路分子的表达。
结果：(1)MDA-MB-468和4T1乳腺癌细胞表面表达PDI和αⅤβ3整合素。(2)凝血酶刺激能促进MDA-MB-468和4T1细胞向胞外释放PDI分子。(3)和inert-PDI相比，wt-PDI能显著增强血浆中玻连蛋白结合到MDA-MB-468和4T1细胞上的能力。(4)常氧和缺氧条件下，玻连蛋白促进MDA-MB-468和4T1细胞的增殖，PDI抑制剂CCF642能显著减弱该促进作用。(5)常氧和缺氧条件下，PDI抑制剂CCF642能显著减弱玻连蛋白诱导MDA-MB-468和4T1细胞转移的能力。(6)常氧和缺氧条件下，玻连蛋白可激活MDA-MB-468和4T1细胞内AKT/mTOR/4EBP1信号通路，而CCF642抑制该通路的活化。
结论：胞外PDI能促进玻连蛋白结合到乳腺癌细胞上，激活乳腺癌细胞内AKT/mTOR/4EBP1信号通路，介导乳腺癌细胞转移。胞外PDI被抑制后，玻连蛋白介导乳腺癌细胞增殖和转移的能力减弱。
方法：(1)细胞免疫荧光染色和流式细胞术确认乳腺癌细胞表面存在PDI和αⅤβ3整合素。(2)Westernblot观察被激活的乳腺癌细胞是否向胞外释放PDI。(3)分别用wt-PDI(有活性)与inert-PDI(无活性)处理血浆，免疫荧光染色分析两种处理后的血浆中玻连蛋白与乳腺癌细胞结合的差异。(4)MTT实验检测玻连蛋白对乳腺癌细胞增殖活性的影响，并研究胞外PDI抑制对玻连蛋白作用的影响。(5)划痕实验和Transwell实验观察胞外PDI被抑制后，玻连蛋白诱导乳腺癌细胞迁移能力的变化。(6)WesternBlot探究玻连蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移相关信号通路的影响，以及胞外PDI抑制后相关信号通路分子的表达。
结果：(1)MDA-MB-468和4T1乳腺癌细胞表面表达PDI和αⅤβ3整合素。(2)凝血酶刺激能促进MDA-MB-468和4T1细胞向胞外释放PDI分子。(3)和inert-PDI相比，wt-PDI能显著增强血浆中玻连蛋白结合到MDA-MB-468和4T1细胞上的能力。(4)常氧和缺氧条件下，玻连蛋白促进MDA-MB-468和4T1细胞的增殖，PDI抑制剂CCF642能显著减弱该促进作用。(5)常氧和缺氧条件下，PDI抑制剂CCF642能显著减弱玻连蛋白诱导MDA-MB-468和4T1细胞转移的能力。(6)常氧和缺氧条件下，玻连蛋白可激活MDA-MB-468和4T1细胞内AKT/mTOR/4EBP1信号通路，而CCF642抑制该通路的活化。
结论：胞外PDI能促进玻连蛋白结合到乳腺癌细胞上，激活乳腺癌细胞内AKT/mTOR/4EBP1信号通路，介导乳腺癌细胞转移。胞外PDI被抑制后，玻连蛋白介导乳腺癌细胞增殖和转移的能力减弱。