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前列腺癌在我国男性人群发病率逐年上升，威胁男性健康。病理活检是确诊前列腺癌的有创方式，前列腺特异性抗原(Prostate Specific Antigen，PSA)特异度低。因此有必要寻找新型无创或微创的检测手段、标志物用于前列腺癌的诊断。外泌体是液体活检领域的新星，反映来源细胞的病理生理状态，有极大的潜力作为疾病诊断的新的标志物。有研究证实前列腺特异性膜抗原(Prostate Specific Membrane Antigen， PSMA)、α-甲酰辅酶A消旋酶(Alpha-methylacyl-CoA racemase，P504s)存在于血清中，对前列腺癌的诊断有重要价值，基于此探索PSA、PSMA、P504s在外泌体中的表达及与前列腺癌的关系，我们进行如下三部分研究。
第一部分目的：建立羧基磁珠偶联抗体一步法富集外泌体的方法体系，研究前列腺癌相关外泌体在前列腺癌诊断中的应用价值。
方法：利用双抗体夹心原理在酶免及磁珠体系进行包被检测关键参数的优化，使用磁珠体系捕获血清中前列腺癌相关外泌体，分析外泌体在前列腺癌、前列腺增生、健康对照的表达，通过电镜及Westernblot进行外泌体捕获验证。
结果：封闭液1，上样量70μl，样本孵育2h，1/2000的酶浓度为酶免体系最适条件。Merck磁珠1.03μm，抗体体积15μl，包被液PH值5.5为磁珠体系最适条件，并且不能认为多种抗体包被磁珠的包被效率及捕获的外泌体一定比单种抗体的高，而是与抗体有关。认为随着前列腺组织癌变进展，外泌体释放量增多。PSA、PSMA在前列腺癌与健康对照中的表达有差异，证明外泌体中含有PSA及PSMA，并进一步证实血清中的PSA抗原与外泌体中的PSA抗原相关性明显。透射电镜观察到羧基磁珠偶联抗体一步法富集的囊泡在30-100nm间，符合外泌体的大小，Westernblot检测到外泌体通用蛋白及前列腺癌相关外泌体蛋白的表达。
结论：本实验构建并优化的羧基磁珠偶联抗体一步法成功用于检测外泌体表面通用蛋白及前列腺癌相关外泌体蛋白。
第二部分和第三部分目的：探讨目前研究者多使用的几种方法提取血清及尿液外泌体的效果，进一步证实本实验羧基磁珠捕获血清及尿液外泌体的可行性。为尿液这种简便易收集、量大无创的理想体液检测前列腺癌提供基础。
方法：使用超速离心法、商业化试剂盒及本实验磁珠富集前列腺癌患者血清及尿液外泌体，使用电镜及Westernblot进行外泌体捕获验证。
结果：使用电镜可知捕获到30-100nm的囊泡，且不同的方法捕获到不同蛋白亚群的外泌体，与超速离心法的对比证实了本实验羧基磁珠偶联抗体一步法富集外泌体的可行性。
结论：羧基磁珠偶联抗体一步法捕获血清外泌体后进行尿液外泌体捕获的初探，与其他方法对比证实本实验的可行性，为血清乃至简便获取的尿液用于诊断前列腺癌的研究做铺垫。
第一部分目的：建立羧基磁珠偶联抗体一步法富集外泌体的方法体系，研究前列腺癌相关外泌体在前列腺癌诊断中的应用价值。
方法：利用双抗体夹心原理在酶免及磁珠体系进行包被检测关键参数的优化，使用磁珠体系捕获血清中前列腺癌相关外泌体，分析外泌体在前列腺癌、前列腺增生、健康对照的表达，通过电镜及Westernblot进行外泌体捕获验证。
结果：封闭液1，上样量70μl，样本孵育2h，1/2000的酶浓度为酶免体系最适条件。Merck磁珠1.03μm，抗体体积15μl，包被液PH值5.5为磁珠体系最适条件，并且不能认为多种抗体包被磁珠的包被效率及捕获的外泌体一定比单种抗体的高，而是与抗体有关。认为随着前列腺组织癌变进展，外泌体释放量增多。PSA、PSMA在前列腺癌与健康对照中的表达有差异，证明外泌体中含有PSA及PSMA，并进一步证实血清中的PSA抗原与外泌体中的PSA抗原相关性明显。透射电镜观察到羧基磁珠偶联抗体一步法富集的囊泡在30-100nm间，符合外泌体的大小，Westernblot检测到外泌体通用蛋白及前列腺癌相关外泌体蛋白的表达。
结论：本实验构建并优化的羧基磁珠偶联抗体一步法成功用于检测外泌体表面通用蛋白及前列腺癌相关外泌体蛋白。
第二部分和第三部分目的：探讨目前研究者多使用的几种方法提取血清及尿液外泌体的效果，进一步证实本实验羧基磁珠捕获血清及尿液外泌体的可行性。为尿液这种简便易收集、量大无创的理想体液检测前列腺癌提供基础。
方法：使用超速离心法、商业化试剂盒及本实验磁珠富集前列腺癌患者血清及尿液外泌体，使用电镜及Westernblot进行外泌体捕获验证。
结果：使用电镜可知捕获到30-100nm的囊泡，且不同的方法捕获到不同蛋白亚群的外泌体，与超速离心法的对比证实了本实验羧基磁珠偶联抗体一步法富集外泌体的可行性。
结论：羧基磁珠偶联抗体一步法捕获血清外泌体后进行尿液外泌体捕获的初探，与其他方法对比证实本实验的可行性，为血清乃至简便获取的尿液用于诊断前列腺癌的研究做铺垫。