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目的：
在腺病毒介导的人ING4基因(Ad-hING4)联合持续低剂量率γ射线(125I粒子)照射对胰腺癌细胞体外抑制生长的协同作用的基础上，本文建立裸鼠胰腺癌PANC-1皮下移植瘤模型，进一步研究Ad-hING4联合125I粒子体内对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑癌增效作用及可能的分子机制。
方法：
(1)将Ad-hING4重组腺病毒和空病毒载体Ad-GFP感染QBI-293A细胞进行扩增并进行效价检测及鉴定；
(2)建立25只裸鼠胰腺癌PANC-1皮下移植瘤模型，当瘤体直径约8～10mm时，将其随机化分成5组，即PBS对照组(简称PBS组)、空载体Ad组(简称Ad组)、125I粒子植入治疗组(简称125I粒子组)、Ad-hING4基因治疗组(简称Ad-hING4组)、125I粒子和Ad-hING4联合治疗组(简称联合治疗组)，每组5只进行抑瘤治疗实验。Ad-hING4组每只瘤体内注射Ad-hING4病毒(1×107pfu/50μl)，PBS组、Ad组瘤体内分别注射等量的PBS和空载体Ad-GFP，隔日1次，共6次；125I粒子组每只瘤体内植入1枚14.8MBq的125I粒子，联合治疗组每只瘤体内各植入1枚14.8MBq的125I粒子并于瘤体内注射Ad-hING4病毒(1×107pfu/50μl)，隔日1次，共6次。每天对裸鼠进行观察管理。
(3)治疗开始后每5天测量1次肿瘤的长、短径并计算体积，V=ab2×0.52(a为长径，b为短径)。20天后处死裸鼠，摘除瘤体，测量肿瘤体积、称瘤重并计算抑瘤率和金氏q值。
(4)常规HE染色病理切片观察细胞生长形态、组织损伤程度和范围并对凋亡指数(apoptotic index，AI)进行检测和评价。
(5)免疫组化SP法检测肿瘤标本中CD34标记的微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及比值(Bcl-2/Bax)、死亡受体Fas、生存素Survivin、活化的Caspase-3凋亡相关蛋白及hING4基因的表达并进行评价。
结果：
(1)重组病毒子经多轮感染、扩增后，Ad-GFP、Ad-hING4经荧光计数法检测其病毒效价滴度均达到109pfu/ml。RT-PCR法鉴定重组病毒子，结果表明腺病毒介导的hING4基因能在PANC-1细胞中成功转录。
(2)成功地建立了人PANC-1胰腺癌细胞裸鼠移植瘤模型，治疗期间，未出现裸鼠死亡及其他的毒性反应。
(3)125I粒子组、Ad-hING4组、联合治疗组三个治疗组抑瘤率分别达到(34.19±10.80)％、(31.50±13.36)％、(67.15±5.15)％，与PBS组和Ad组相比均有显著性差异(P<0.01)，且联合治疗组抑瘤率明显高于125I粒子组和Ad-hING4组(P<0.01)，125I粒子和Ad-hING4联合应用具有协同抑癌效应(q=1.22)。
(4)常规病理切片检查显示近粒子处肿瘤细胞变性坏死，远离粒子处可见存活肿瘤细胞；其它组癌细胞的变性坏死与距离关系不大。三个治疗组凋亡指数(AI)显著高于PBS组和Ad组(P<0.001)，且联合治疗组与其它两个单因素治疗组相比也有显著性差异(P<0.001)。
(5)免疫组化检测
①Ad-hING4或/和125I粒子对胰腺癌移植瘤血管形成的影响
三个治疗组CD34标记的MVD和VEGF明显低于PBS组和Ad组(P<0.05)，且联合治疗组MVD和VEGF也明显低于其它两个单因素治疗组相应指标(P<0.01)。
②Ad-hING4或/和125I粒子对胰腺癌细胞增殖的影响
三个治疗组PCNA阳性细胞数明显少于PBS组和Ad组(P<0.05)，且联合治疗组也明显少于其它两个单因素治疗组(P<0.05)。
③Ad-hING4或/和125I粒子对胰腺癌细胞凋亡相关蛋白的影响
三个治疗组Bcl-2阳性细胞数明显低于PBS和Ad组(P<0.05)，但联合治疗组与其它两个单因素治疗组相比无显著性差异(P>0.05)：三个治疗组Bax阳性细胞数明显高于PBS和Ad组(P<0.05)，且联合治疗组明显高于其它两个单因素治疗组(P<0.05)；三个治疗组Bcl-2、Bax的比值(Bcl-2/Bax)与PBS和Ad组相比显著性降低(P<0.001)，且联合治疗组明显低于其它两个单因素治疗组(P<0.001)；三个治疗组Survivin阳性细胞数明显低于PBS组和Ad组(P<0.001)，且联合治疗组也明显低于其它两单因素治疗组(P<0.001)：三个治疗组Fas、Caspase-3阳性细胞数明显高于PBS组和Ad组(P<0.01)，且联合治疗组也明显高于其它两个单因素治疗组(P<0.05)。
以上各指标125I粒子组与Ad-hING4组、Ad组与PBS组相比均无显著性差异(p>0.05)。
④hING4基因的体内转染表达效率
Ad-hING4组、联合治疗组转染hING4基因在瘤体组织细胞中的表达效率分别为34.38±8.49和32.16±7.51，明显高于PBS组、Ad组和125I粒子组(p<0.05)。
结论：
(1)125I粒子、Ad-hING4可显著抑制裸鼠PANC-1胰腺癌移植瘤的生长，两者联合应用具有抑癌增效的协同作用(q=1.22)，Ad-hING4有望作为一种新的放疗增敏剂；
(2)抑癌增效协同作用机制：
①抑制移植瘤微血管的形成，如抑制CD34、VEGF蛋白的表达；
②抑制胰腺癌细胞的增殖，如下调PCNA蛋白的表达；
③促进胰腺癌细胞的凋亡如降低Bcl-2与Bax的比值，下调Survivin蛋白的表达，诱导Fas和Caspase-3蛋白的表达。