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目的:研究附子多糖对胃癌基质金属蛋白酶表达的影响,以期明确附子多糖抗胃癌的作用,进一步明确附子多糖抗胃癌的作用机制,为附子多糖抗胃癌作用提供基础理论依据,为胃癌提供新的治疗思路和治疗途径。
方法:本实验应用水提醇沉法及Sevage法对白附片进行提取和纯化,制备精制附子多糖;应用体外细胞培养技术培养MFC胃癌细胞,建立MFC胃癌细胞移植瘤裸鼠动物模型,得到荷瘤裸鼠;采用将附子多糖干预治疗荷瘤裸鼠的整体实验方法,拟用附子多糖给予荷瘤裸鼠治疗性灌胃,观察附子多糖对荷瘤裸鼠的体重、肿瘤体积、肿瘤重量、抑瘤率、脾脏指数以及肿瘤细胞形态学等方面的影响,并应用免疫组化法、Real-Time PCR法检测附子多糖对荷瘤裸鼠移植瘤组织中MMP-2及MMP-14表达量的影响结果。
结果:1、本实验中,给予附子多糖干预治疗后发现,与模型组比较,附子多糖高、低剂量组荷瘤裸鼠的体重均无明显差异(P>0.05),但肿瘤体积增长速度缓慢(P<0.01,P<0.05),肿瘤重量减轻(P<0.01),抑瘤率分别为50.84%、39.92%,MFC胃癌细胞移植瘤组织中残存遗留下来的癌细胞数目较少,有明显改善;与模型组及氟尿嘧啶组比较,附子多糖高、低剂量组荷瘤裸鼠的脾脏重量增加,脾脏指数增高,分别为(90.10±8.65)mg/g、(84.71±13.21)mg/g(P<0.01,P<0.05);附子多糖在抑制MFC胃癌细胞移植瘤生长作用及提高荷瘤裸鼠免疫功能作用效果方面,高剂量组优于低剂量组,呈剂量依赖性。
2、本实验中,免疫组化检测结果发现,MFC胃癌细胞移植瘤组织中MMP-2、MMP-14蛋白表达阳性产物均为棕黄色;MMP-2阳性表达多集中在细胞浆、细胞质上,MMP-14阳性表达多集中在细胞浆、细胞膜上;给予附子多糖干预治疗后,与模型组比较,附子多糖高、低剂量组MFC胃癌细胞移植瘤组织中MMP-2蛋白表达量下调(P<0.05),MMP-14蛋白表达量下调(P<0.01,P<0.05)。
3、本实验中,Real-Time PCR检测结果发现,给予附子多糖干预治疗后,与模型组比较,附子多糖高、低剂量组MFC胃癌细胞移植瘤组织中MMP-2基因mRNA的表达水平呈降低表现,分别约低于模型组0.74、0.75倍数(2-ΔΔCt值比较,P<0.05),MMP-14基因mRNA的表达水平呈降低表现,分别约低于模型组0.73、0.78倍数(2-△△Ct值比较,P<0.01,P<0.05)。
结论:1、附子多糖对MFC胃癌细胞移植瘤的生长有一定的抑制作用,且无明显毒性。
2、附子多糖抑制MFC胃癌细胞移植瘤生长的作用机制是下调MMP-2和MMP-14的表达。
3、附子多糖在抑制MFC胃癌细胞移植瘤生长过程中表现出对免疫器官有保护作用,对外周免疫功能有一定的提高作用,这也可能是其发挥抗MFC胃癌细胞移植瘤生长的作用机制。
4、附子多糖在抑制MFC胃癌细胞移植瘤生长的作用和提高荷瘤裸鼠外周免疫功能的作用效果方面,高剂量组优于低剂量组,呈现出剂量依赖性。
方法:本实验应用水提醇沉法及Sevage法对白附片进行提取和纯化,制备精制附子多糖;应用体外细胞培养技术培养MFC胃癌细胞,建立MFC胃癌细胞移植瘤裸鼠动物模型,得到荷瘤裸鼠;采用将附子多糖干预治疗荷瘤裸鼠的整体实验方法,拟用附子多糖给予荷瘤裸鼠治疗性灌胃,观察附子多糖对荷瘤裸鼠的体重、肿瘤体积、肿瘤重量、抑瘤率、脾脏指数以及肿瘤细胞形态学等方面的影响,并应用免疫组化法、Real-Time PCR法检测附子多糖对荷瘤裸鼠移植瘤组织中MMP-2及MMP-14表达量的影响结果。
结果:1、本实验中,给予附子多糖干预治疗后发现,与模型组比较,附子多糖高、低剂量组荷瘤裸鼠的体重均无明显差异(P>0.05),但肿瘤体积增长速度缓慢(P<0.01,P<0.05),肿瘤重量减轻(P<0.01),抑瘤率分别为50.84%、39.92%,MFC胃癌细胞移植瘤组织中残存遗留下来的癌细胞数目较少,有明显改善;与模型组及氟尿嘧啶组比较,附子多糖高、低剂量组荷瘤裸鼠的脾脏重量增加,脾脏指数增高,分别为(90.10±8.65)mg/g、(84.71±13.21)mg/g(P<0.01,P<0.05);附子多糖在抑制MFC胃癌细胞移植瘤生长作用及提高荷瘤裸鼠免疫功能作用效果方面,高剂量组优于低剂量组,呈剂量依赖性。
2、本实验中,免疫组化检测结果发现,MFC胃癌细胞移植瘤组织中MMP-2、MMP-14蛋白表达阳性产物均为棕黄色;MMP-2阳性表达多集中在细胞浆、细胞质上,MMP-14阳性表达多集中在细胞浆、细胞膜上;给予附子多糖干预治疗后,与模型组比较,附子多糖高、低剂量组MFC胃癌细胞移植瘤组织中MMP-2蛋白表达量下调(P<0.05),MMP-14蛋白表达量下调(P<0.01,P<0.05)。
3、本实验中,Real-Time PCR检测结果发现,给予附子多糖干预治疗后,与模型组比较,附子多糖高、低剂量组MFC胃癌细胞移植瘤组织中MMP-2基因mRNA的表达水平呈降低表现,分别约低于模型组0.74、0.75倍数(2-ΔΔCt值比较,P<0.05),MMP-14基因mRNA的表达水平呈降低表现,分别约低于模型组0.73、0.78倍数(2-△△Ct值比较,P<0.01,P<0.05)。
结论:1、附子多糖对MFC胃癌细胞移植瘤的生长有一定的抑制作用,且无明显毒性。
2、附子多糖抑制MFC胃癌细胞移植瘤生长的作用机制是下调MMP-2和MMP-14的表达。
3、附子多糖在抑制MFC胃癌细胞移植瘤生长过程中表现出对免疫器官有保护作用,对外周免疫功能有一定的提高作用,这也可能是其发挥抗MFC胃癌细胞移植瘤生长的作用机制。
4、附子多糖在抑制MFC胃癌细胞移植瘤生长的作用和提高荷瘤裸鼠外周免疫功能的作用效果方面,高剂量组优于低剂量组,呈现出剂量依赖性。