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研究背景与目的：
结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是世界范围内最常见的癌症之一。在我国，随着人民的生活水平的提高，结直肠癌的发病率呈上升趋势。早期结直肠癌的5年总生存率(overall survival，OS)高于90%。初诊时局部进展的患者5年OS仅为69.2%，伴有远处转移的患者5年生存率更低。结直肠癌的治疗是以手术为主的综合治疗，可行根治性手术的患者其预后优于无法行根治性手术的患者。针对低位直肠癌的治疗，考虑到保留肛门的问题，部分患者无法接受mils’手术。新辅助治疗作为结直肠治疗过程中的重要手段，可提高结直肠癌患者的R0切除率，提高低位直肠癌患者的保肛率。同时新辅助治疗也可降低局部复发率，减少手术过程中肿瘤肿瘤细胞的播散。对于结直肠癌患者来说，新辅助治疗也是一把双刃剑。部分患者因接受新辅助治疗而错过手术机会。接受新辅助治疗疗程过长会导致患者肝肾功能降低，对手术的耐受减低。准确判断新辅助治疗的疗效，使得患者最大化受益玉新辅助已成为亟待解决的临床问题。目前结直肠肠癌的新辅助治疗效果的评价主要依靠影像学检查以及血清肿瘤标志物。然而二者在敏感性和特异性方面均不尽如人意。循环肿瘤脱氧核苷酸(circulating tumor deoxyribonucleic acid，ctDNA)已经引起了科研工作者及临床工作者的重视。ctDNA主要由肿瘤细胞的凋亡和坏死释放入外周血中，是具有肿瘤特异性的脱氧核苷酸(deoxyribonucleic acid，DNA)片段。由于ctDNA在血液中浓度极低，因此对ctDNA的检测困难重重。随着二代测序的普及，关于ctDNA的研究越来越多。目前ctDNA已经被国内外学者证实具有早期诊断实体肿瘤，监测治疗效果，帮助判断复发风险及预后，帮助患者进行靶向药物的选择，耐药机制的探究，对患者进行分层管理等多方面的作用。然而，对ctDNA监测结直肠癌新辅助治疗效果的相关研究依旧较少。本研究拟结合二代测序技术，对接受新辅助治疗的结直肠癌患者治疗不同时期的ctDNA进行检测，从而探究ctDNA在接受新辅助治疗的结直肠癌患者中的应用价值。
研究方法：
选取2016年5月1日至2017年1月30日期间于广州医科大学附属肿瘤医院就诊的，临床评估需接受新辅助化疗的结直肠癌患者。每位患者签订“入组知情同意书”。患者均接受奥沙利铂+5-Fu的方案行新辅助化疗。于治疗前，2程新辅助治疗后，手术前2-5天以及术后2-7天四个时间点留取血标本约10ml。离心后将血浆与血细胞分开保存于-80℃冰箱中。手术标本离体后30min内留取肿瘤组织标本，保存于-80℃冰箱中。将标本收集完整后，同批次予IlluminaNextseq2000平台对获取的结直肠癌患者的血浆DNA、血细胞DNA以及匹配的肿瘤组织进行高通量测序。对外周血cfDNA进行定量分析。对ctDNA进行定量和定性分析。利用广州医科大学肿瘤医院病历管理系统对入组患者的临床病理信息进行收集。结合患者临床资料以及测序结果，对ctDNA在结直肠癌新辅助治疗过程中的应用价值进行评估。
结果：
(1)入组6位患者，其中1位患者伴肝转移，5位患者均无明显远处转移。将入组患者按照肿瘤分期分为转移组与非转移组。转移组cfDNA浓度为50.4825±22.1026ng/ml；非转移组cfDNA浓度为16.9695±9.1003。
(2)入组的6位患者中，1位患者新辅助治疗后疗效评估为CR，两位患者疗效评估为PR，还有三位患者疗效评估为SD。从变化趋势上判断ctDNA的变化趋势与治疗效果更加吻合，而CEA变化趋势与患者治疗疗效的吻合度比ctDNA差。ctDNA对治疗评价新辅助治疗效果的性能优于CEA。
(3)5位患者同时进行了组织测序以及血浆DNA高通量测序。其中1位患者血浆可检测到目标基因的突变，而组织标本中无法检测到目标基因的突变。1位患者组织中可检测到基因突变，但血浆中无法检测到突变基因。3位患者血清及组织中均可检测到突变基因，但突变谱不完全一致。
结论：
(1)cfDNA浓度在一定程度上可反映结直肠癌的患者的肿瘤负荷。
(2)对接受新辅助治疗的结直肠癌患者的疗效监测，ctDNA优于CEA。
(3)结直肠癌患者外周血和组织标本突变谱存在差异。
结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是世界范围内最常见的癌症之一。在我国，随着人民的生活水平的提高，结直肠癌的发病率呈上升趋势。早期结直肠癌的5年总生存率(overall survival，OS)高于90%。初诊时局部进展的患者5年OS仅为69.2%，伴有远处转移的患者5年生存率更低。结直肠癌的治疗是以手术为主的综合治疗，可行根治性手术的患者其预后优于无法行根治性手术的患者。针对低位直肠癌的治疗，考虑到保留肛门的问题，部分患者无法接受mils’手术。新辅助治疗作为结直肠治疗过程中的重要手段，可提高结直肠癌患者的R0切除率，提高低位直肠癌患者的保肛率。同时新辅助治疗也可降低局部复发率，减少手术过程中肿瘤肿瘤细胞的播散。对于结直肠癌患者来说，新辅助治疗也是一把双刃剑。部分患者因接受新辅助治疗而错过手术机会。接受新辅助治疗疗程过长会导致患者肝肾功能降低，对手术的耐受减低。准确判断新辅助治疗的疗效，使得患者最大化受益玉新辅助已成为亟待解决的临床问题。目前结直肠肠癌的新辅助治疗效果的评价主要依靠影像学检查以及血清肿瘤标志物。然而二者在敏感性和特异性方面均不尽如人意。循环肿瘤脱氧核苷酸(circulating tumor deoxyribonucleic acid，ctDNA)已经引起了科研工作者及临床工作者的重视。ctDNA主要由肿瘤细胞的凋亡和坏死释放入外周血中，是具有肿瘤特异性的脱氧核苷酸(deoxyribonucleic acid，DNA)片段。由于ctDNA在血液中浓度极低，因此对ctDNA的检测困难重重。随着二代测序的普及，关于ctDNA的研究越来越多。目前ctDNA已经被国内外学者证实具有早期诊断实体肿瘤，监测治疗效果，帮助判断复发风险及预后，帮助患者进行靶向药物的选择，耐药机制的探究，对患者进行分层管理等多方面的作用。然而，对ctDNA监测结直肠癌新辅助治疗效果的相关研究依旧较少。本研究拟结合二代测序技术，对接受新辅助治疗的结直肠癌患者治疗不同时期的ctDNA进行检测，从而探究ctDNA在接受新辅助治疗的结直肠癌患者中的应用价值。
研究方法：
选取2016年5月1日至2017年1月30日期间于广州医科大学附属肿瘤医院就诊的，临床评估需接受新辅助化疗的结直肠癌患者。每位患者签订“入组知情同意书”。患者均接受奥沙利铂+5-Fu的方案行新辅助化疗。于治疗前，2程新辅助治疗后，手术前2-5天以及术后2-7天四个时间点留取血标本约10ml。离心后将血浆与血细胞分开保存于-80℃冰箱中。手术标本离体后30min内留取肿瘤组织标本，保存于-80℃冰箱中。将标本收集完整后，同批次予IlluminaNextseq2000平台对获取的结直肠癌患者的血浆DNA、血细胞DNA以及匹配的肿瘤组织进行高通量测序。对外周血cfDNA进行定量分析。对ctDNA进行定量和定性分析。利用广州医科大学肿瘤医院病历管理系统对入组患者的临床病理信息进行收集。结合患者临床资料以及测序结果，对ctDNA在结直肠癌新辅助治疗过程中的应用价值进行评估。
结果：
(1)入组6位患者，其中1位患者伴肝转移，5位患者均无明显远处转移。将入组患者按照肿瘤分期分为转移组与非转移组。转移组cfDNA浓度为50.4825±22.1026ng/ml；非转移组cfDNA浓度为16.9695±9.1003。
(2)入组的6位患者中，1位患者新辅助治疗后疗效评估为CR，两位患者疗效评估为PR，还有三位患者疗效评估为SD。从变化趋势上判断ctDNA的变化趋势与治疗效果更加吻合，而CEA变化趋势与患者治疗疗效的吻合度比ctDNA差。ctDNA对治疗评价新辅助治疗效果的性能优于CEA。
(3)5位患者同时进行了组织测序以及血浆DNA高通量测序。其中1位患者血浆可检测到目标基因的突变，而组织标本中无法检测到目标基因的突变。1位患者组织中可检测到基因突变，但血浆中无法检测到突变基因。3位患者血清及组织中均可检测到突变基因，但突变谱不完全一致。
结论：
(1)cfDNA浓度在一定程度上可反映结直肠癌的患者的肿瘤负荷。
(2)对接受新辅助治疗的结直肠癌患者的疗效监测，ctDNA优于CEA。
(3)结直肠癌患者外周血和组织标本突变谱存在差异。