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研究背景与目的
肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，以下简称肝癌或HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，占原发性肝癌的90%。多数HCC患者确诊时已达局部晚期或发生肝外转移，丧失根治性手术治疗机会，预后较差。尽管HCC的治疗手段不断进步，患者的生存率在过去十年并没有显著的改善，形势仍十分严峻。因此寻找与HCC发生发展、术后早期复发及预后相关的分子指标物，早期预测高危患者，对其进行早期干预，降低患者术后复发率，具有重要的临床意义。学者在酿酒酵母菌中首次发现Ras转化内切酶(Ras converting CAAX endopeptidase 1 ,RCE1)，是一种Ⅱ型CAAX异戊二烯肽链内切酶。RCE1主要生理功能是水解含有CAAX结构域的蛋白，包括Ras蛋白，小GTP超家族成员和G蛋白γ亚基，是Ras蛋白成熟和定位相关的关键酶。Ras蛋白参与调控部分肿瘤细胞生长和增殖信号通路，RCE1可能也参与其中，然而具体机制和作用尚不明确。
本研究的目的为明确RCE1在肝细胞癌组织标本的表达情况，统计分析其与肝细胞癌患者临床病理参数的相关性，分析术后复发以及生存的预测价值；明确RCE1在肝癌细胞中发挥的功能。
材料与方法
1、通过免疫组织化学实验检测RCE1在221例肝癌组织及匹配癌旁组织标本的表达情况；
2、通过χ2检验分析RCE1与肝癌患者临床病理参数的相关性，Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验分析其与复发、生存的相关性；
3、统计分析RCE1与AFP阴性肝癌患者和AFP阳性肝癌患者预后的相关性；
4、通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验，检测RCE1在肝癌细胞的表达情况；
5、选择两株肝癌细胞作为实验株，分别过表达RCE1和慢病毒干扰RCE1表达，以实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验验证RCE1表达量；
6、通过CCK-8细胞增殖实验检测肝癌细胞增殖能力变化；
7、通过细胞划痕实验检测RCE1的肝癌细胞迁移能力变化；
8、通过Transwell小室迁移实验检测肝癌细胞迁移能力变化。
实验结果
1、肝癌组织中RCE1蛋白的表达明显低于匹配的癌旁肝组织(P＜0.001)；RCE1在81/221(36.65%)例肝癌组织中高表达，而在癌旁肝组织高表达的有153/221(69.23%)例；
2、RCE1与肝癌患者临床病理参数的相关性分析显示，RCE1表达与AFP水平、肿瘤直径和脉管浸润相关(P＜0.05)；
3、生存分析的结果显示RCE1表达缺失的患者，术后易复发，总生存期短。RCE1低表达的肝癌患者，1、3、5年的总生存率(66.43%,50.00%,45.71%)明显低于RCE1高表达的肝癌患者(85.19%,69.14%,67.90%)(P=0.001)；且复发率(67.86%)明显高于RCE1高表达的肝癌患者(54.32%)(P=0.011)；RCE1低表达是影响肝癌患者预后的独立危险因素；
4、RCE1低表达的AFP阴性肝癌患者和AFP阳性肝癌患者，术后易复发，生存期短(P＜0.01)；RCE1可作为判断AFP阴性肝癌患者术后预后的分子指标；
5、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验验证过表达质粒和shRNA慢病毒有效干预RCE1表达；
6、CCK-8细胞增殖实验显示下调肝癌细胞SMMC-7721RCE1的表达可明显提高肿瘤细胞的增殖能力，细胞划痕实验和Transwell小室迁移实验显示下调肝癌细胞SMMC-7721RCE1的表达可明显增强肿瘤细胞的迁移能力；上调RCE1的表达可明显减弱肿瘤细胞的增殖和迁移能力。
结论
1、肝癌组织中RCE1蛋白表达明显低于匹配的癌旁组织，且与肿瘤患者术前血清AFP水平、肿瘤直径和脉管浸润相关，与侵袭转移相关；
2、肝癌组织中RCE1表达缺失的患者，术后易复发，总生存期短；RCE1低表达是影响肝癌患者预后的独立危险因素；
3、RCE1可作为评价AFP阴性肝癌患者术后预后的分子指标；
4、RCE1抑制肝癌细胞增殖和迁移能力。
肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，以下简称肝癌或HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，占原发性肝癌的90%。多数HCC患者确诊时已达局部晚期或发生肝外转移，丧失根治性手术治疗机会，预后较差。尽管HCC的治疗手段不断进步，患者的生存率在过去十年并没有显著的改善，形势仍十分严峻。因此寻找与HCC发生发展、术后早期复发及预后相关的分子指标物，早期预测高危患者，对其进行早期干预，降低患者术后复发率，具有重要的临床意义。学者在酿酒酵母菌中首次发现Ras转化内切酶(Ras converting CAAX endopeptidase 1 ,RCE1)，是一种Ⅱ型CAAX异戊二烯肽链内切酶。RCE1主要生理功能是水解含有CAAX结构域的蛋白，包括Ras蛋白，小GTP超家族成员和G蛋白γ亚基，是Ras蛋白成熟和定位相关的关键酶。Ras蛋白参与调控部分肿瘤细胞生长和增殖信号通路，RCE1可能也参与其中，然而具体机制和作用尚不明确。
本研究的目的为明确RCE1在肝细胞癌组织标本的表达情况，统计分析其与肝细胞癌患者临床病理参数的相关性，分析术后复发以及生存的预测价值；明确RCE1在肝癌细胞中发挥的功能。
材料与方法
1、通过免疫组织化学实验检测RCE1在221例肝癌组织及匹配癌旁组织标本的表达情况；
2、通过χ2检验分析RCE1与肝癌患者临床病理参数的相关性，Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验分析其与复发、生存的相关性；
3、统计分析RCE1与AFP阴性肝癌患者和AFP阳性肝癌患者预后的相关性；
4、通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验，检测RCE1在肝癌细胞的表达情况；
5、选择两株肝癌细胞作为实验株，分别过表达RCE1和慢病毒干扰RCE1表达，以实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验验证RCE1表达量；
6、通过CCK-8细胞增殖实验检测肝癌细胞增殖能力变化；
7、通过细胞划痕实验检测RCE1的肝癌细胞迁移能力变化；
8、通过Transwell小室迁移实验检测肝癌细胞迁移能力变化。
实验结果
1、肝癌组织中RCE1蛋白的表达明显低于匹配的癌旁肝组织(P＜0.001)；RCE1在81/221(36.65%)例肝癌组织中高表达，而在癌旁肝组织高表达的有153/221(69.23%)例；
2、RCE1与肝癌患者临床病理参数的相关性分析显示，RCE1表达与AFP水平、肿瘤直径和脉管浸润相关(P＜0.05)；
3、生存分析的结果显示RCE1表达缺失的患者，术后易复发，总生存期短。RCE1低表达的肝癌患者，1、3、5年的总生存率(66.43%,50.00%,45.71%)明显低于RCE1高表达的肝癌患者(85.19%,69.14%,67.90%)(P=0.001)；且复发率(67.86%)明显高于RCE1高表达的肝癌患者(54.32%)(P=0.011)；RCE1低表达是影响肝癌患者预后的独立危险因素；
4、RCE1低表达的AFP阴性肝癌患者和AFP阳性肝癌患者，术后易复发，生存期短(P＜0.01)；RCE1可作为判断AFP阴性肝癌患者术后预后的分子指标；
5、实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验验证过表达质粒和shRNA慢病毒有效干预RCE1表达；
6、CCK-8细胞增殖实验显示下调肝癌细胞SMMC-7721RCE1的表达可明显提高肿瘤细胞的增殖能力，细胞划痕实验和Transwell小室迁移实验显示下调肝癌细胞SMMC-7721RCE1的表达可明显增强肿瘤细胞的迁移能力；上调RCE1的表达可明显减弱肿瘤细胞的增殖和迁移能力。
结论
1、肝癌组织中RCE1蛋白表达明显低于匹配的癌旁组织，且与肿瘤患者术前血清AFP水平、肿瘤直径和脉管浸润相关，与侵袭转移相关；
2、肝癌组织中RCE1表达缺失的患者，术后易复发，总生存期短；RCE1低表达是影响肝癌患者预后的独立危险因素；
3、RCE1可作为评价AFP阴性肝癌患者术后预后的分子指标；
4、RCE1抑制肝癌细胞增殖和迁移能力。