【摘 要】
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野生型变铅青链霉菌具有一种不同于甲基化修饰的新型DNA硫修饰系统，使DNA在电泳时易遭到氧化双链切割而导致降解（Dnd, DNA degradation）表型（Zhou et al., 1988, 1994, 1999）。己证实该菌株染色体上一段8.3kb的区域与Dnd表型有关，序列分析显示该区域包含了3个ORFs—dndA, dndB和dndC（Zhou et al., 1999；李爱英，200
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野生型变铅青链霉菌具有一种不同于甲基化修饰的新型DNA硫修饰系统，使DNA在电泳时易遭到氧化双链切割而导致降解（Dnd, DNA degradation）表型（Zhou et al., 1988, 1994, 1999）。己证实该菌株染色体上一段8.3kb的区域与Dnd表型有关，序列分析显示该区域包含了3个ORFs—dndA, dndB和dndC（Zhou et al., 1999；李爱英，2000）。为了验证这三个基因与Dnd表型的关系，构建了一系列衍生于整合型载体pSET152的质粒：pHZ2150，pHZ2151，pHZ2152和pHZ2153。它们均携带包含3个ORFs的区域（除了pHZ2153在dndB和dndC内缺失了2kb），但已分别在各ORF上发生单基因中断（pHZ2150，pHZ2151和pHZ2152上外源片段的中断分别发生在dndA，月和C上）。将它们导入Dnd表型缺失突变株ZX1中进行基因互补实验，结果证明变铅青链霉菌and基因簇上的3个ORFs均为Dnd所必需。 对野生型变铅青链霉菌dnd基因簇的生物学功能进行了初步探索。以野生型变铅青链霉菌和各dnd基因突变株为研究对象，对它们在极端培养条件（极端pH，高温，高盐和低氧）下的生长状况和对11株噬菌体的感染性进行了比较，结果在测试条件下，没有发现野生型菌株和不同dnd基因突变株之间存在明显差异。提取各菌株低氧条件下培养物的DNA进行电泳检测，结果揭示该生长条件不能改变这两种菌株原有的Dnd表型。 在PFGE中发现耻垢分枝杆菌mc~2155也具有Dnd表型。将变铅青链霉菌的dnd基因簇与mc~2155的基因组序列（未测完）进行同源比较后，发现mc~2155中存在dndA的同源基因（暂命名为mddl），且二者在氨基酸水平上的同一性为38％。根据该基因的序列设计了两对特异引物，以mc~2155 DNA为模板，扩增得到0.9kb和1.1kb的产物。其中的0.9kb产物经测序验证与mddl的序列一致。以pHZ132为载体，构建了mc~2155的基因组文库。以0.9kb的扩增产物为探针从文库中钓出10个阳性克隆子。在此基础上构建了用于在mc~2155中进行mddl基因中断的载体pHZ2157。
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