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桔梗为桔梗科植物桔梗Platycodon gradiflorum(Jacq.)A.DC.的干燥根，收录于《中国药典》（2020年版）一部，最早记载可追溯《神农本草经》。桔梗作为药食同源中药材，具有镇咳祛痰、抗炎抑菌、抗肿瘤、抗氧化、美白护肤、免疫调节等药理作用，近年来，作为食品、药品、化妆品原料使用广泛。
目的：本论文以桔梗为研究主体，采用中药现代化提取分离技术结合药效跟踪法，在分子水平上筛选寻找其具有美白作用的活性部位；对该活性部位进行化学成分分析及指纹图谱研究；在细胞水平上进行美白活性作用机制研究，为进一步开发利用中药桔梗资源奠定基础，为开发天然美白化妆品提供理论基础。
方法：1、美白活性部位的提取与分离：以氧自由基、酪氨酸酶、透明质酸酶为靶点，以抗氧化和酶抑制活性为考察指标，采用药效跟踪法，对结合文献报道具有美白作用的不同提取物进行活性筛选，获得美白活性提取物，采用单因素考察和响应面设计实验，对提取工艺进行优选；应用溶剂萃取分离技术和柱层析纯化技术，对最佳活性提取物进行分离纯化，依据抗氧化和酶抑制活性筛选结果，从中获得桔梗最佳美白活性部位（PGE-ACT-WT）。
2、美白活性部位的化学成分分析：采用Q-Orbitrap高分辨液相-质谱联用技术等现代化学成分分析技术对PGE-ACT-WT中的有效组分及化学成分进行全面鉴定与分析。
3、美白活性部位的指纹图谱研究：应用高效液相色谱-蒸发光散射检测法和中药色谱指纹图谱相似度评价系统，依据所获得的有效成分，建立其高效液相指纹色谱图，结合聚类分析和主成分分析对PGE-ACT-WT进行化学模式识别分析。
4、美白活性部位的作用机制研究：以B16F10小鼠黑色素瘤细胞、HepG2人肝癌细胞、264.7巨噬细胞为对象，以酪氨酸酶、黑色素、氧化指标、炎症因子为靶点，在细胞水平上研究PGE-ACT-WT的酶抑制、黑色素生成抑制、抗氧化、抗炎活性，综合探讨PGE-ACT-WT的美白作用机制。
结果：1、美白活性部位的提取与分离研究：采用药效跟踪法，以抗氧化活性、酪氨酸酶抑制活性、透明质酸酶抑制活性为考察指标，针对设计的3条提取工艺所得到的11种提取物进行筛选，最终得到提取物11（95%醇提取物PGE-E5）为桔梗美白活性提取物。采用单因素考察和响应面设计实验，对提取工艺参数进行优选，获得桔梗最佳美白活性提取物（PGE-ME5），提取工艺优化结果为：提取次数3次，提取时间1h，溶媒量8倍。运用传统中药分离纯化方法分离得到3个分离部位，通过活性筛选获得桔梗最佳美白活性分离物3（70%乙醇溶液洗脱物PGE-S3）。通过上述提取、分离工艺的研究，最终成功地获得了桔梗最佳美白活性部位（PGE-ACT-WT）。
2、美白活性部位的的化学成分分析：应用Q-Orbitrap高分辨液相-质谱联用技术从PGE-ACT-WT中鉴定得到了45个化合物，主要为皂苷类：桔梗皂苷D、桔梗皂苷D3、桔梗皂苷E，酚酸类：熊果苷、绿原酸、烟酸、α-酮酸，黄酮类：槲皮素、木犀草素、大豆苷元、黄芩苷，苯丙醇苷类：紫丁香苷。此外还鉴定出了大量的皂苷类、酚酸类以及黄酮类化合物。查阅文献结果表明上述所鉴定得到45个化合物中的大部分化合物具有一定的潜在美白活性。
3、美白活性部位的指纹图谱研究：在化学成分分析的基础上，采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法，运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，利用多点校正法建立了PGE-ACT-WT指纹图谱，根据生成的19个共有峰指纹图谱模式图，使用对照品比对法，通过保留时间和色谱行为的比对，共指认8个色谱峰，分别为熊果苷、紫丁香苷、绿原酸、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、黄芩苷、桔梗皂苷D、木犀草素。且文献研究表明上述所指认的8个成分均具有较好的美白活性。
4、美白活性部位的作用机制研究：
4.1抑制酪氨酸酶活性和黑色素生成实验结果表明：PGE-ACT-WT各剂量组均能抑制B16F10细胞胞内酪氨酸酶的活性和黑色素的生成，且具有剂量依赖性，PGE-ACT-WT高剂量组的细胞酪氨酸酶抑制活性明显高于熊果苷和桔梗皂苷D阳性对照组。给药48小时，PGE-ACT-WT显示最强的细胞酪氨酸酶抑制活性和黑色素生成抑制活性，当给药时间增加到72小时，活性反而降低，说明PGE的最佳给药时间为48小时。
4.2抗氧化实验结果表明：PGE-ACT-WT各剂量组对HepG2细胞上清液MDA含量成剂量依赖性下降，T-AOC能力成剂量依赖性增加，PGE-ACT-WT高剂量组的MDA含量明显低于Vc阳性对照组，PGE-ACT-WT各剂量组T-AOC能力明显高于Vc阳性对照组，显示了较强的抗氧化能力。
4.3抗炎实验结果表明：PGE-ACT-WT各剂量组呈剂量依赖性的下调LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞中的TNF-α和IL-6促炎因子水平，显示了较强的抗炎活性。
上述研究结果表明PGE-ACT-WT发挥美白活性主要是通过良好的抑制细胞酪氨酸酶活性、抑制细胞黑色素生成活性、抗氧化活性和抗炎活性共同发挥作用，达到皮肤美白作用。
结论：本实验采用现代中药提取分离技术结合药效跟踪法得到PGE-ACT-WT，针对所得到PGE-ACT-WT，采用Q-Orbitrap高分辨液相-质谱联用技术明确PGE-ACT-WT的药效物质组成；采用HPLC-ELSD技术结合现代分析方法建立PGE-ACT-WT的指纹图谱；采用现代生物学技术在细胞水平上探讨PGE-ACT-WT的美白活性作用机制，为桔梗美白产品的开发及应用提供理论依据。
目的：本论文以桔梗为研究主体，采用中药现代化提取分离技术结合药效跟踪法，在分子水平上筛选寻找其具有美白作用的活性部位；对该活性部位进行化学成分分析及指纹图谱研究；在细胞水平上进行美白活性作用机制研究，为进一步开发利用中药桔梗资源奠定基础，为开发天然美白化妆品提供理论基础。
方法：1、美白活性部位的提取与分离：以氧自由基、酪氨酸酶、透明质酸酶为靶点，以抗氧化和酶抑制活性为考察指标，采用药效跟踪法，对结合文献报道具有美白作用的不同提取物进行活性筛选，获得美白活性提取物，采用单因素考察和响应面设计实验，对提取工艺进行优选；应用溶剂萃取分离技术和柱层析纯化技术，对最佳活性提取物进行分离纯化，依据抗氧化和酶抑制活性筛选结果，从中获得桔梗最佳美白活性部位（PGE-ACT-WT）。
2、美白活性部位的化学成分分析：采用Q-Orbitrap高分辨液相-质谱联用技术等现代化学成分分析技术对PGE-ACT-WT中的有效组分及化学成分进行全面鉴定与分析。
3、美白活性部位的指纹图谱研究：应用高效液相色谱-蒸发光散射检测法和中药色谱指纹图谱相似度评价系统，依据所获得的有效成分，建立其高效液相指纹色谱图，结合聚类分析和主成分分析对PGE-ACT-WT进行化学模式识别分析。
4、美白活性部位的作用机制研究：以B16F10小鼠黑色素瘤细胞、HepG2人肝癌细胞、264.7巨噬细胞为对象，以酪氨酸酶、黑色素、氧化指标、炎症因子为靶点，在细胞水平上研究PGE-ACT-WT的酶抑制、黑色素生成抑制、抗氧化、抗炎活性，综合探讨PGE-ACT-WT的美白作用机制。
结果：1、美白活性部位的提取与分离研究：采用药效跟踪法，以抗氧化活性、酪氨酸酶抑制活性、透明质酸酶抑制活性为考察指标，针对设计的3条提取工艺所得到的11种提取物进行筛选，最终得到提取物11（95%醇提取物PGE-E5）为桔梗美白活性提取物。采用单因素考察和响应面设计实验，对提取工艺参数进行优选，获得桔梗最佳美白活性提取物（PGE-ME5），提取工艺优化结果为：提取次数3次，提取时间1h，溶媒量8倍。运用传统中药分离纯化方法分离得到3个分离部位，通过活性筛选获得桔梗最佳美白活性分离物3（70%乙醇溶液洗脱物PGE-S3）。通过上述提取、分离工艺的研究，最终成功地获得了桔梗最佳美白活性部位（PGE-ACT-WT）。
2、美白活性部位的的化学成分分析：应用Q-Orbitrap高分辨液相-质谱联用技术从PGE-ACT-WT中鉴定得到了45个化合物，主要为皂苷类：桔梗皂苷D、桔梗皂苷D3、桔梗皂苷E，酚酸类：熊果苷、绿原酸、烟酸、α-酮酸，黄酮类：槲皮素、木犀草素、大豆苷元、黄芩苷，苯丙醇苷类：紫丁香苷。此外还鉴定出了大量的皂苷类、酚酸类以及黄酮类化合物。查阅文献结果表明上述所鉴定得到45个化合物中的大部分化合物具有一定的潜在美白活性。
3、美白活性部位的指纹图谱研究：在化学成分分析的基础上，采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法，运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，利用多点校正法建立了PGE-ACT-WT指纹图谱，根据生成的19个共有峰指纹图谱模式图，使用对照品比对法，通过保留时间和色谱行为的比对，共指认8个色谱峰，分别为熊果苷、紫丁香苷、绿原酸、桔梗皂苷E、桔梗皂苷D3、黄芩苷、桔梗皂苷D、木犀草素。且文献研究表明上述所指认的8个成分均具有较好的美白活性。
4、美白活性部位的作用机制研究：
4.1抑制酪氨酸酶活性和黑色素生成实验结果表明：PGE-ACT-WT各剂量组均能抑制B16F10细胞胞内酪氨酸酶的活性和黑色素的生成，且具有剂量依赖性，PGE-ACT-WT高剂量组的细胞酪氨酸酶抑制活性明显高于熊果苷和桔梗皂苷D阳性对照组。给药48小时，PGE-ACT-WT显示最强的细胞酪氨酸酶抑制活性和黑色素生成抑制活性，当给药时间增加到72小时，活性反而降低，说明PGE的最佳给药时间为48小时。
4.2抗氧化实验结果表明：PGE-ACT-WT各剂量组对HepG2细胞上清液MDA含量成剂量依赖性下降，T-AOC能力成剂量依赖性增加，PGE-ACT-WT高剂量组的MDA含量明显低于Vc阳性对照组，PGE-ACT-WT各剂量组T-AOC能力明显高于Vc阳性对照组，显示了较强的抗氧化能力。
4.3抗炎实验结果表明：PGE-ACT-WT各剂量组呈剂量依赖性的下调LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞中的TNF-α和IL-6促炎因子水平，显示了较强的抗炎活性。
上述研究结果表明PGE-ACT-WT发挥美白活性主要是通过良好的抑制细胞酪氨酸酶活性、抑制细胞黑色素生成活性、抗氧化活性和抗炎活性共同发挥作用，达到皮肤美白作用。
结论：本实验采用现代中药提取分离技术结合药效跟踪法得到PGE-ACT-WT，针对所得到PGE-ACT-WT，采用Q-Orbitrap高分辨液相-质谱联用技术明确PGE-ACT-WT的药效物质组成；采用HPLC-ELSD技术结合现代分析方法建立PGE-ACT-WT的指纹图谱；采用现代生物学技术在细胞水平上探讨PGE-ACT-WT的美白活性作用机制，为桔梗美白产品的开发及应用提供理论依据。