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目的:总结炙淫羊藿的研究现状,对淫羊藿、炙淫羊藿有效组分进行提取、分离,比较12批炙淫羊藿化学成分差异。研究淫羊藿、炙淫羊藿对肾损伤大鼠的保护作用。
方法:1.对淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类化合物的不同提取溶剂进行优化,确立了70%乙醇-水溶液作为溶剂,加热回流,即得到淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类化合物的粗提液。对粗提液进行减压、蒸馏、氯仿萃取脱脂,聚酰胺树脂柱吸附、70%乙醇-水溶液洗脱,计算淫羊藿、炙淫羊藿总黄酮含量与收率。对淫羊藿、炙淫羊藿的粗提液用于后面药理活性实验的备用;采用水提醇沉法提取淫羊藿、炙淫羊藿的多糖类成分,Seavge法除蛋白,将除蛋白后的总多糖经过各种溶剂的洗涤,得到精制的淫羊藿、炙淫羊藿多糖类组分,计算淫羊藿、炙淫羊藿总多糖的含量与收率;
2.对炙淫羊藿黄酮类成分的提取溶剂、提取方式、提取时间及提取次数等条件进行优化;
3.HPLC法以乙腈(A)-水(B)为流动相,检测炙淫羊藿中7种黄酮类成分的含量,并进行方法学考察,建立淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类成分指纹图谱;
4.对炙淫羊藿黄酮类成分进行一测多评,以淫羊藿苷为参照峰计算其他6个成分的相对校正因子,对比外标法与一测多评法的检测结果;
5.以炙淫羊藿中7种黄酮类成分含量为变量进行多化学计量法分析;
6.建立大鼠肾损伤模型,对大鼠进行行为学观察、测量体重、检测淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类成分对肾损伤大鼠血清水平、肾功能指标,血常规因子的影响,并比较病理切片变化评价淫羊藿、炙淫羊藿总黄酮对肾损伤大鼠保护作用的效果。
结果:1.对淫羊藿、炙淫羊藿所提取、分离得到的淫羊藿、炙淫羊藿中总黄酮、总多糖类组分进行定量分析,其总黄酮含量平均值分别为6.87%、6.75%,收率平均值分别为12.66%、12.15%;总多糖类组分的含量平均值分别为4.89mg/g、4.35mg/g,收率为3.65%、2.48%。相比较于炙淫羊藿,淫羊藿中黄酮类、多糖类组分含量和收率比较高。
2.炙淫羊藿黄酮类成分的提取条件优化:称取过24目筛的样品粉末250mg,全部转移至锥形瓶中,加入70%乙醇-水溶液,25mL,超声提取30min,将提取的溶液放至到室温,称重,用70%的乙醇去补足在提取过程中损失的重量,并把溶液混匀,就得到所需要的供试品溶液。
建立了炙淫羊藿黄酮类成分的HPLC检测方法,并指认了7个色谱峰分别为朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、宝藿苷Ⅱ、淫羊藿次苷Ⅰ,并建立了淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类成分指纹图谱,12批淫羊藿、12批炙淫羊藿相似度均大于0.92。
一测多评结果显示以淫羊藿苷为参照物计算另外6个成分的相对校正因子分别为1.389、1.401、1.494、0.839、1.524、0.881并对校正因子进行重现性考察,外标法实测值与一测多评计算值无显著差异。
3.造模后体重明显下降、眼神暗淡,皮毛无光泽,造模成功,给药组体重略微下降,眼神也较顺铂单独给药组明亮;造模后大鼠UA、CRE、BUN、MDA、NO、NEUT%、LYMPH%含量显著升高,与空白组有显著差异(P<0.05),SOD、MONO%含量显著降低,与空白组有显著差异(P<0.05);淫羊藿低剂量、淫羊藿高剂量、炙淫羊藿低剂量、炙淫羊藿高剂量对各项指标均有良好的改善效果,炙淫羊藿高剂量组改善效果更好。
结论:淫羊藿、炙淫羊藿中黄酮类、多糖类成分经提取、分离后,较炙淫羊藿相比,淫羊藿的黄酮类、多糖类含量和收率较高;指纹图谱结合一测多评对炙淫羊藿进行了定性与定量分析,全面评价了炙淫羊藿;采取顺铂成功造模大鼠肾损伤,淫羊藿、炙淫羊藿各个剂量均具有保护作用,炙淫羊藿高剂量保护效果最好。
方法:1.对淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类化合物的不同提取溶剂进行优化,确立了70%乙醇-水溶液作为溶剂,加热回流,即得到淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类化合物的粗提液。对粗提液进行减压、蒸馏、氯仿萃取脱脂,聚酰胺树脂柱吸附、70%乙醇-水溶液洗脱,计算淫羊藿、炙淫羊藿总黄酮含量与收率。对淫羊藿、炙淫羊藿的粗提液用于后面药理活性实验的备用;采用水提醇沉法提取淫羊藿、炙淫羊藿的多糖类成分,Seavge法除蛋白,将除蛋白后的总多糖经过各种溶剂的洗涤,得到精制的淫羊藿、炙淫羊藿多糖类组分,计算淫羊藿、炙淫羊藿总多糖的含量与收率;
2.对炙淫羊藿黄酮类成分的提取溶剂、提取方式、提取时间及提取次数等条件进行优化;
3.HPLC法以乙腈(A)-水(B)为流动相,检测炙淫羊藿中7种黄酮类成分的含量,并进行方法学考察,建立淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类成分指纹图谱;
4.对炙淫羊藿黄酮类成分进行一测多评,以淫羊藿苷为参照峰计算其他6个成分的相对校正因子,对比外标法与一测多评法的检测结果;
5.以炙淫羊藿中7种黄酮类成分含量为变量进行多化学计量法分析;
6.建立大鼠肾损伤模型,对大鼠进行行为学观察、测量体重、检测淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类成分对肾损伤大鼠血清水平、肾功能指标,血常规因子的影响,并比较病理切片变化评价淫羊藿、炙淫羊藿总黄酮对肾损伤大鼠保护作用的效果。
结果:1.对淫羊藿、炙淫羊藿所提取、分离得到的淫羊藿、炙淫羊藿中总黄酮、总多糖类组分进行定量分析,其总黄酮含量平均值分别为6.87%、6.75%,收率平均值分别为12.66%、12.15%;总多糖类组分的含量平均值分别为4.89mg/g、4.35mg/g,收率为3.65%、2.48%。相比较于炙淫羊藿,淫羊藿中黄酮类、多糖类组分含量和收率比较高。
2.炙淫羊藿黄酮类成分的提取条件优化:称取过24目筛的样品粉末250mg,全部转移至锥形瓶中,加入70%乙醇-水溶液,25mL,超声提取30min,将提取的溶液放至到室温,称重,用70%的乙醇去补足在提取过程中损失的重量,并把溶液混匀,就得到所需要的供试品溶液。
建立了炙淫羊藿黄酮类成分的HPLC检测方法,并指认了7个色谱峰分别为朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、宝藿苷Ⅱ、淫羊藿次苷Ⅰ,并建立了淫羊藿、炙淫羊藿黄酮类成分指纹图谱,12批淫羊藿、12批炙淫羊藿相似度均大于0.92。
一测多评结果显示以淫羊藿苷为参照物计算另外6个成分的相对校正因子分别为1.389、1.401、1.494、0.839、1.524、0.881并对校正因子进行重现性考察,外标法实测值与一测多评计算值无显著差异。
3.造模后体重明显下降、眼神暗淡,皮毛无光泽,造模成功,给药组体重略微下降,眼神也较顺铂单独给药组明亮;造模后大鼠UA、CRE、BUN、MDA、NO、NEUT%、LYMPH%含量显著升高,与空白组有显著差异(P<0.05),SOD、MONO%含量显著降低,与空白组有显著差异(P<0.05);淫羊藿低剂量、淫羊藿高剂量、炙淫羊藿低剂量、炙淫羊藿高剂量对各项指标均有良好的改善效果,炙淫羊藿高剂量组改善效果更好。
结论:淫羊藿、炙淫羊藿中黄酮类、多糖类成分经提取、分离后,较炙淫羊藿相比,淫羊藿的黄酮类、多糖类含量和收率较高;指纹图谱结合一测多评对炙淫羊藿进行了定性与定量分析,全面评价了炙淫羊藿;采取顺铂成功造模大鼠肾损伤,淫羊藿、炙淫羊藿各个剂量均具有保护作用,炙淫羊藿高剂量保护效果最好。