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目的：本课题通过建立AngⅡ致HUVECs损伤模型，以ROS/NF-κB/NLRP3信号通路为靶点探讨芪七连胶囊对HUVECs的保护作用机制，以阐明其抗高血压可能分子机制，为芪七连胶囊的进一步临床应用提供科学依据。
方法：
1、建立高血压环境下的血管内皮细胞炎症损伤模型。
以HUVECs为研究对象，分别筛选0、10-5、10-7、10-9、10-11mol/L不同浓度的AngⅡ溶液，以及0，3，6，12，24，48h不同时间下刺激HUVECs，采用Westernblot检测各组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达情况。
2、以HUVECs为研究对象，探讨AngⅡ对ROS/NF-κB/NLRP3信号通路的调控作用。
建立HUVECs高血压模型，分别以DPI、PDTC、MCC950、DPI+PDTC进行干预，采用流式细胞仪技术检测各组细胞凋亡情况以及ROS生成；采用Westernblot检测各组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB蛋白表达；采用ELISA法检测该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达。
3、采用AngⅡ致HUVECs损伤模型，以ROS/NF-κB/NLRP3信号通路为靶点探讨芪七连胶囊对HUVECs的保护作用机制。
建立HUVECs高血压模型，分别以芪七连胶囊含药血清高、中、低剂量组进行干预，采用流式细胞仪技术检测各组细胞凋亡情况以及ROS 生成；采用Westernblot检测各组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB蛋白表达；采用ELISA法检测该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达。
结果：
1、模拟高血压环境下的血管内皮细胞炎症损伤模型。
①在AngⅡ溶液浓度为10-7mol/L时，HUVECs中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加程度最高。
②使用最佳干预浓度刺激HUVECs时，刺激时间为24h时，HUVECs中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加程度最高。
2、以HUVECs为研究对象，探讨AngⅡ对ROS/NF-κB/NLRP3信号通路的调控作用。
①采用AngⅡ干预HUVECs，可引起细胞凋亡；但采用DPI、PDTC、MCC950、DPI+PDTC干预，与模型组比较，均可减少HUVECs的凋亡(P<0.01)。提示通过抑制ROS生成或(和)NF-κB蛋白表达、NLRP3炎症小体活性均可保护血管内皮细胞。
②采用AngⅡ干预HUVECs，可诱导ROS/NF-κB/NLRP3信号通路活化。分别抑制ROS的生成或(和)NF-κB蛋白表达、NLRP3炎症小体活性，与模型组比较，各给药组均可抑制NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达(P<0.01)，并下调ROS/NF-κB/NLRP3信号通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达(P<0.01)。提示AngⅡ诱导HUVECs损伤，可能是通过促进机体中ROS生成及NF-κB蛋白上调，激活NLRP3炎症小体，从而上调ROS/NF-κB/NLRP3信号通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达，引起细胞损伤。
3、采用AngⅡ致HUVECs损伤模型，以ROS/NF-κB/NLRP3信号通路为靶点探讨芪七连胶囊对HUVECs的保护作用机制。
①与模型组比较，芪七连胶囊高、中、低组均可以减少HUVECs 的凋亡(P<0.01)，提示芪七连胶囊可保护血管内皮细胞。
②与模型组比较，芪七连胶囊高、中、低组均减少ROS的生成(P<0.01)，下调NF-κB蛋白表达(P<0.01)；抑制NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达(P<0.01)，并下调ROS/NF-κB/NLRP3信号通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达(P<0.01)。提示芪七连胶囊可能通过抑制ROS表达，下调NF-κB蛋白表达，抑制NLRP3炎症小体活性，下调该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达，从而起到保护血管内皮细胞的作用。
结论：
1、AngⅡ对HUVECs具有损伤作用，干预浓度在10-7mol/L，干预时间在24h为最佳。
2、AngⅡ可能通过激活ROS/NF-κB/NLRP3炎症小体通路，上调该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达，从而诱导血管内皮细胞损伤。
3、芪七连胶囊通过抑制ROS/NF-κB/NLRP3炎症小体通路活化，降低该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达，从而保护血管内皮细胞。
方法：
1、建立高血压环境下的血管内皮细胞炎症损伤模型。
以HUVECs为研究对象，分别筛选0、10-5、10-7、10-9、10-11mol/L不同浓度的AngⅡ溶液，以及0，3，6，12，24，48h不同时间下刺激HUVECs，采用Westernblot检测各组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达情况。
2、以HUVECs为研究对象，探讨AngⅡ对ROS/NF-κB/NLRP3信号通路的调控作用。
建立HUVECs高血压模型，分别以DPI、PDTC、MCC950、DPI+PDTC进行干预，采用流式细胞仪技术检测各组细胞凋亡情况以及ROS生成；采用Westernblot检测各组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB蛋白表达；采用ELISA法检测该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达。
3、采用AngⅡ致HUVECs损伤模型，以ROS/NF-κB/NLRP3信号通路为靶点探讨芪七连胶囊对HUVECs的保护作用机制。
建立HUVECs高血压模型，分别以芪七连胶囊含药血清高、中、低剂量组进行干预，采用流式细胞仪技术检测各组细胞凋亡情况以及ROS 生成；采用Westernblot检测各组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB蛋白表达；采用ELISA法检测该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达。
结果：
1、模拟高血压环境下的血管内皮细胞炎症损伤模型。
①在AngⅡ溶液浓度为10-7mol/L时，HUVECs中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加程度最高。
②使用最佳干预浓度刺激HUVECs时，刺激时间为24h时，HUVECs中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加程度最高。
2、以HUVECs为研究对象，探讨AngⅡ对ROS/NF-κB/NLRP3信号通路的调控作用。
①采用AngⅡ干预HUVECs，可引起细胞凋亡；但采用DPI、PDTC、MCC950、DPI+PDTC干预，与模型组比较，均可减少HUVECs的凋亡(P<0.01)。提示通过抑制ROS生成或(和)NF-κB蛋白表达、NLRP3炎症小体活性均可保护血管内皮细胞。
②采用AngⅡ干预HUVECs，可诱导ROS/NF-κB/NLRP3信号通路活化。分别抑制ROS的生成或(和)NF-κB蛋白表达、NLRP3炎症小体活性，与模型组比较，各给药组均可抑制NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达(P<0.01)，并下调ROS/NF-κB/NLRP3信号通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达(P<0.01)。提示AngⅡ诱导HUVECs损伤，可能是通过促进机体中ROS生成及NF-κB蛋白上调，激活NLRP3炎症小体，从而上调ROS/NF-κB/NLRP3信号通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达，引起细胞损伤。
3、采用AngⅡ致HUVECs损伤模型，以ROS/NF-κB/NLRP3信号通路为靶点探讨芪七连胶囊对HUVECs的保护作用机制。
①与模型组比较，芪七连胶囊高、中、低组均可以减少HUVECs 的凋亡(P<0.01)，提示芪七连胶囊可保护血管内皮细胞。
②与模型组比较，芪七连胶囊高、中、低组均减少ROS的生成(P<0.01)，下调NF-κB蛋白表达(P<0.01)；抑制NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达(P<0.01)，并下调ROS/NF-κB/NLRP3信号通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达(P<0.01)。提示芪七连胶囊可能通过抑制ROS表达，下调NF-κB蛋白表达，抑制NLRP3炎症小体活性，下调该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达，从而起到保护血管内皮细胞的作用。
结论：
1、AngⅡ对HUVECs具有损伤作用，干预浓度在10-7mol/L，干预时间在24h为最佳。
2、AngⅡ可能通过激活ROS/NF-κB/NLRP3炎症小体通路，上调该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达，从而诱导血管内皮细胞损伤。
3、芪七连胶囊通过抑制ROS/NF-κB/NLRP3炎症小体通路活化，降低该通路下游致炎因子IL-1β、IL-18的表达，从而保护血管内皮细胞。