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狂犬病是由狂犬病毒(Rabies virus，RV)引起的一种重要人兽共患的急性传染病。根据已知的Hep-Flury株N基因序列，设计并合成了一对含保护碱基和BamHI、HindⅢ酶切位点的引物，成功扩增出N基因完整开放阅读框架(ORF)，其长度为1353bp，克隆进pMD18 Simple T Vector，将测序正确的目的基因亚克隆入表达载体pQE30中，转化DH5α宿主菌，构建了重组表达质粒pQE-N。PCR和BamHI、HindⅢ酶切鉴定及测序鉴定表明构建正确。
将重组表达质粒pQE-N转化表达菌M15，挑取单菌落，经IPTG诱导后进行SDS-PAGE蛋白电泳，结果表明在相对分子量50KDa左右处出现一条蛋白带，IPTG诱导浓度为0.3mmol/L，诱导起始时间约为3h，诱导4h后表达量即可达到高峰。Western-blotting 分析显示，重组蛋白能被特异的狂犬病阳性血清所识别，具有良好的反应原性。
收集诱导表达的菌液，超声波破碎菌体，离心后分别收集上清和沉淀，进行SDS-PAGE分析，结果表明表达产物主要以包涵体形式存在。用8M尿素溶解包涵体，SDS-PAGE蛋白电泳后切下目的蛋白条带再用透析法复性浓缩，获得纯化的重组蛋白。
将切下目的条带在低温下研磨，加入弗氏完全佐剂(一免)、弗氏不完全佐剂(二、三免)制成油乳剂疫苗；用此油乳剂疫苗三次免疫和纯化的重组蛋白超免雄性家兔，制备高免血清。用琼脂扩散试验和Western-blotting对高免血清的效价和特异性进行鉴定，结果显示高免血清有较高的效价和良好的免疫特异性，从而为今后制备抗N重组蛋白的荧光抗体奠定了基础。
用硫酸铵盐析法、透析法和Sephadex G25层析法除盐、透析法浓缩蛋白溶液，从高免血清中纯化出免疫球蛋白IgG。用搅拌法标记荧光素，Sephadex G25层析法去除游离荧光素，透析法浓缩蛋白溶液，制备抗N重组蛋白荧光抗体。