雏鸭鸭瘟病毒的分离鉴定及主要毒力基因的序列分析

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本研究从广东某鸭场发病雏鸭病料中分离到一株病毒,通过生物学特性研究发现该病毒对氯仿、胰蛋白酶敏感,不能凝集1%的鸡红细胞。电镜负染观察可见该病毒呈球形,有囊膜,直径约为140nm~150nm。用自行设计的鸭瘟病毒特异性鉴定引物DP7/8,通过PCR方法,从该病毒培养物中扩增出450bp左右的目的条带。测序结果表明该扩增产物与鸭瘟病毒UL30-UL31部分基因序列相似性为99%—100%。综合以上鉴定结果,证明本研究分离到的病毒为鸭瘟病毒,将该病毒命名为DPV—Q株。测定其毒力效价为ELD50=10-2.5/0.2mL,LD50=10-1.34/2mL。 研究发现:DPV—Q株可以感染DEF细胞,但连续盲传三代后,不产生明显的细胞病变。该病毒适合在9~11d鸭胚中增殖,引起胚体死亡、出血,肝脏略黄染,表面有出血点。用DPV—Q株人工感染7日龄、14日龄、21日龄的雏鸭和雏鹅后,实验动物出现肿头流泪,两脚发软,胫跖关节肿大,排绿色稀粪,呼吸困难等典型的鸭瘟症状和肝脏肿大、出血,消化道充血、出血,眼结膜充血、出血等病理变化。攻毒后雏鸭、雏鹅的死亡主要发生在14日龄组,雏鸭死亡率为40%,雏鹅死亡率为20%,相比之下,雏鸭对鸭瘟病毒的易感性高于雏鹅。 根据已发表的鸭瘟病毒rK、gC和gG基因序列设计引物,通过PCR方法,成功扩增和克隆了鸭瘟病毒DPV—Q株的TK、gC和gG基因,测序发现TK基因的ORF长1,077 bp,编码359个氨基酸;gC基因的ORF长1,296bp,编码432个氨基酸;gG基因的ORF长1,380bp,编码460个氨基酸。序列分析比较结果表明,DPV—Q株的TK、gC和gG基因高度保守。 本研究还应用SOPMA方法、3DJIGSAW数据库和DNAStar Protean软件综合分析了TK、gC、gG蛋白二、三级结构及gC、gG蛋白的亲水性、表面特性、柔韧性和抗原指数,并对gC、gG蛋白的B抗原表位进行了预测。结果表明,DPV—Q株gC蛋白的B细胞表位可能在32~37、56~61、82~85、107~116、128~141、202~207、239~246、256~260、274~280、312~317、381~391这些区域内或附近;gG蛋白的B细胞表位可能在23~28、69~74、182~188、196~199、264~277、290~296、343~346、449~454这些区域内或附近。
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