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2002-2003年暴发的SARS(Severe Acute Respiratory Syndrome)是由一类新型冠状病毒引起的高致死率的呼吸道疾病,在随后的SARS冠状病毒自然溯源中,在蝙蝠体内发现一类与SARS冠状病毒在基因组上有很高相似性的冠状病毒,命名为SARS样冠状病毒(SL-CoV)。本论文拟对蝙蝠体内SL-CoV的细胞受体进行研究。结果如下:
1.分别构建了含有人CD209(huCD209和小蹄蝠CD209(hcCD209)的瞬时表达载体(pcDNA3.1-huCD209,pcDNA3.1-hcCD209),转染293T细胞后检测huCD209或者hcCD209能否协助蝙蝠SL-CoV入侵细胞。实验结果证明包装有蝙蝠SL-CoV S蛋白的HIV假病毒(HIV/Rp3-S)可进入表达huCD209的293T细胞,但不能进入表达hcCD209的细胞。甘露聚糖抑制实验和血清学中和试验进一步证明,huCD209能够介导HW/Rp3-S的入侵。推测SL-CoV S与huCD209的结合区域与人SARS-CoV S蛋白与huCD209的结合区域相似。
2.利用RT-PCR的方法得到包括小蹄蝠(Hipposidero cineraceus)、中菊头蝠(Rhinolophus affinis)、大足鼠耳蝠(Myotis ricketti)、大蹄蝠(Hipposideros armiger)和中蹄蝠(Hipposideros larvatus)在内的CD209的同源基因片断,分别命名为hcCD209、raCD209、mrCD209、haCD209和hlCD209。序列分析发现,蝙蝠CD209基因与人CD209基因核苷酸相似性在41%~65%之间,且存在着不同程度的缺失,如小蹄蝠CD209与人CD209基因相比存在三段缺失。同时,蝙蝠物种CD209基因序列之间亦存在较大差异。比较不同种属扩增获得的CD209基因发现,蹄蝠属CD209基因与中菊头蝠相应基因差异较大,序列相似性在75%至85%之间,这些基因序列上的差异很可能导致其行使不同的功能。
这些结果为后续研究蝙蝠CD209与SL-CoV的关系以及其与SL-CoV S蛋白相互作用奠定了基础。