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本论文进行尖顶羊肚菌活性提取物降血压试验,并使用大孔树脂和DEAE—纤维素凝胶对其进行分离纯化,这将为食药用真菌的降血压研究提供理论基础,为开发新的降血压保健食品和药品提供实验依据。具体研究方法及结果如下:
1.通过注射N—硝基—L—精氨酸(L—NNA)建立大鼠高血压模型,分别用50mg/kg·d(低剂量)、100mg/kg·d(中剂量)、200mg/kg·d(高剂量)的尖顶羊肚菌活性提取物(BEMC)灌胃高血压模型大鼠,观察其对大鼠收缩压、心率、体重、脾指数、肝指数、心指数、肾指数、血清中血管紧张素Ⅱ(ANG—Ⅱ)、一氧化氮(NO)和尿素氮(BUN)含量的影响。结果显示,与造模组相比,低、中、高剂量组大鼠的收缩压分别下降了17.79%(P<0.01)、6.99%和17.24%(P<0.01)。低、高剂量组尖顶羊肚菌活性提取物能显著抑制高血压大鼠的收缩压升高。低剂量组大鼠的血清NO含量增加了6.79%,中剂量组大鼠的血清BUN含量减少了10.06%。低、中剂量组大鼠的血清ANG—Ⅱ含量分别减少了10.98%和27.29%,心率分别降低了7.51%和5.26%,心指数分别增加了7.66%(P<0.05)和9.75%(P<0.05),肾指数分别增加了0.24%和5.16%(P<0.05),肝指数分别增加了3.61%和4.89%。而高剂量组大鼠的肾指数减少了6.27%(P<0.05)。与给药前大鼠心率比较,28d时低剂量组大鼠心率显著降低。
2.本文使用大孔吸附树脂对尖项羊肚菌活性提取物进行分离纯化。通过比较四种大孔吸附树脂对尖顶羊肚菌活性提取物的静态吸附性能,筛选出最佳树脂。试验依次考察上柱液浓度、上样流速、动态饱和吸附量与氯化钠溶液梯度洗脱对尖顶羊肚菌活性提取物进行纯化的影响。试验结果表明:S—8树脂对尖顶羊肚菌活性提取物的静态吸附能力最强,适用于尖顶羊肚菌活性提取物的分离纯化。控制上柱液浓度为100μg/ml,以1.0ml/min的流速进样时,S—8树脂的饱和吸附量达到最大,为0.6340mg/g(以干树脂质量计)。对吸附饱和树脂依次用浓度为0.25mol/L、0.5 mol/L、1.0mol/L和2.0mol/L的氯化钠溶液分段洗脱,测得总糖的解吸率分别为41.83%、8.62%、3.63%和0.49%。
3.采用DEAE—纤维素凝胶对尖顶羊肚菌活性提取物进行了分离纯化。试验依次考察tris—HCl缓冲液的pH、浓度与氯化钠溶液梯度洗脱对尖顶羊肚菌活性提取物进行纯化的影响。结果表明,控制tris—HCl缓冲液的pH为7.5、浓度为0.0004mol/L时,总糖的吸附率达到44.58%。对吸附的凝胶依次用浓度为0.1 mol/L、0.2mol/L和0.4mol/L的氯化钠溶液分段洗脱,测得总糖的解吸率分别为44.66%、7.16%和0%。
4.尖顶羊肚菌活性提取物成分研究结果表明,纯化前尖顶羊肚菌活性提取物(BEMC)中多糖含量为40.62%,蛋白质含量为5.85%,经S—8大孔树脂和DEAE—纤维素凝胶纯化后的尖顶羊肚菌活性物质(PBEMC)中多糖含量减少到8.89%,蛋白质含量提高到59.65%。将PBEMC进行紫外光谱扫描,结果表明PBEMC在280nm处有一个峰值较大的吸收峰,而在190nm-260nm处的吸收峰均很小。这说明纯化后尖顶羊肚菌活性物质的主要成份为蛋白质。