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目的:
本实验在原有成果的基础上,结合中医“治未病”理论,根据体质的生理病理特点以及肾-唾相关理论,基于“恐伤肾”,建立大鼠肾虚体质动物模型,采用氢化可的松注射建立肾虚证候大鼠的实验动物模型。观察肾虚体质、肾虚证大鼠一般情况,肾脏形态与组织的HE染色变化;从蛋白角度探讨唾液中胱抑素C、β2-MG含量改变,以及补肾中药六味地黄丸对大鼠肾脏功能的干预作用,为临床开展体质的无创伤辨识技术与肾虚性疾病的早期预警奠定基础,亦为肾虚体质的相关老年性慢病提供早期诊断和预防指导,丰富肾藏象理论。
方法:
SPF级2月龄SD大鼠共24只,其中雌鼠16只,雄鼠8只。合笼交配成功后,随机分为Ⅰ、Ⅱ两组,一组采用猫吓鼠+外界刺激的造模方法使母鼠肾精受损,造成仔鼠先天肾精不足+后天恐吓的肾虚体质动物模型,一组采用肌注氢化可的松(每日25mg生药/kg体重)十天,建立肾虚证(肾阴虚)实验动物模型。观察各组大鼠一般情况,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠唾液中胱抑素C、β2-微球蛋白的含量变化与差异性,采取Mayer氏苏木素对大鼠肾脏组织进行HE染色观察。探讨六味地黄丸对肾虚体质、肾虚证候的改善作用,对肾功能损伤修复的机制,评定经典六味地黄丸对于肾虚体质、肾虚证候以及肾功能损伤等相关疾病的临床价值。采用SPSS19.0统计软件,进行数据处理分析。
结果:
①大鼠一般状况观察:造模结束,正常对照组的大鼠体重增加,毛发密状态佳,自主活动多,性情柔顺,无易激惹躁动现象,反应灵敏,饮食、尿量均表现正常。肾虚体质组,体重下降,嗜蜷缩扎堆,容易惊吓。肾虚证候组大鼠多出现烦躁不安、易激惹拱背,毛发枯槁稀疏,易脱落,体重下降明显。肾虚体质干预组与肾虚证候组,其大鼠在精神、饮食、毛发上都有改善。②唾液胱抑素C、β2-MG变化及中药干预:通过ELISA检测可知,肾虚体质组与肾虚证候组唾液胱抑素C、β2-MG的浓度值明显高于正常组,差异性明显(P<0.01)。肾虚证候干预组与肾虚体质干预组胱抑素C、β2-MG明显低于肾虚证候组与肾虚体质,有P<0.05,明显差异,P<0.05,有统计学意义。肾虚证候组比肾虚体质组唾液胱抑素C、β2-MG的浓度值略高一些,但无明显差异,P>0.05,无统计学意义。肾虚证候干预组比肾虚体质组的唾液胱抑素C、β2-MG的值略高,且体质干预组倾向于正常对照组,其P>0.05,无显著差异,无统计学意义。③肾脏组织形态与HE染色检测:与正常对照组相比,肾虚体质组与肾虚证候组的肾体重与肾指数明显降低,有统计学意义(P<0.05);中药六味地黄丸肾虚干预组与肾虚证候组相对于肾虚体质组与肾虚证候来说,肾重与指数升高,具有统计学意义(P<0.05);肾虚体质组与肾虚证候组虽有差异,但无统计学意义(P>0.05)。肾脏组织经石蜡HE染色发现,正常对照组肾脏组织多表现为正常肾脏,肾虚体质组大鼠少量肾小球轻度萎缩,肾小球数目变化不大。肾虚体质干预组多表现为正常肾脏,组织呈正常。肾虚证候组中肾小球大小形态与数量变化大,数量明显减少,肾脏组织出现不同程度的肿胀瘀血。肾虚证候干预组大鼠肾小球轻度萎缩,肾小球数目未见明显减少。
结论:
基于内经“恐伤肾”理论建立先天不足肾虚体质实验动物模型;采用当前较为成熟的方案,应用氢化可的松注射建立肾虚证候(肾阴虚证)实验动物模型,突出中医特色。研究发现肾虚体质与肾虚证候大鼠不仅体重减轻,行为能力下降,肾小球组织结构变化,唾液胱抑素C、β2-MG含量升高,与肾功能损伤程度可能具有很大相关性;中药六味地黄丸可修复肾组织,降低唾液胱抑素C、β2-MG含量,同时改善肾虚体质与肾虚证候大鼠因肾功能受损而出现的各类症状。
本实验在原有成果的基础上,结合中医“治未病”理论,根据体质的生理病理特点以及肾-唾相关理论,基于“恐伤肾”,建立大鼠肾虚体质动物模型,采用氢化可的松注射建立肾虚证候大鼠的实验动物模型。观察肾虚体质、肾虚证大鼠一般情况,肾脏形态与组织的HE染色变化;从蛋白角度探讨唾液中胱抑素C、β2-MG含量改变,以及补肾中药六味地黄丸对大鼠肾脏功能的干预作用,为临床开展体质的无创伤辨识技术与肾虚性疾病的早期预警奠定基础,亦为肾虚体质的相关老年性慢病提供早期诊断和预防指导,丰富肾藏象理论。
方法:
SPF级2月龄SD大鼠共24只,其中雌鼠16只,雄鼠8只。合笼交配成功后,随机分为Ⅰ、Ⅱ两组,一组采用猫吓鼠+外界刺激的造模方法使母鼠肾精受损,造成仔鼠先天肾精不足+后天恐吓的肾虚体质动物模型,一组采用肌注氢化可的松(每日25mg生药/kg体重)十天,建立肾虚证(肾阴虚)实验动物模型。观察各组大鼠一般情况,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠唾液中胱抑素C、β2-微球蛋白的含量变化与差异性,采取Mayer氏苏木素对大鼠肾脏组织进行HE染色观察。探讨六味地黄丸对肾虚体质、肾虚证候的改善作用,对肾功能损伤修复的机制,评定经典六味地黄丸对于肾虚体质、肾虚证候以及肾功能损伤等相关疾病的临床价值。采用SPSS19.0统计软件,进行数据处理分析。
结果:
①大鼠一般状况观察:造模结束,正常对照组的大鼠体重增加,毛发密状态佳,自主活动多,性情柔顺,无易激惹躁动现象,反应灵敏,饮食、尿量均表现正常。肾虚体质组,体重下降,嗜蜷缩扎堆,容易惊吓。肾虚证候组大鼠多出现烦躁不安、易激惹拱背,毛发枯槁稀疏,易脱落,体重下降明显。肾虚体质干预组与肾虚证候组,其大鼠在精神、饮食、毛发上都有改善。②唾液胱抑素C、β2-MG变化及中药干预:通过ELISA检测可知,肾虚体质组与肾虚证候组唾液胱抑素C、β2-MG的浓度值明显高于正常组,差异性明显(P<0.01)。肾虚证候干预组与肾虚体质干预组胱抑素C、β2-MG明显低于肾虚证候组与肾虚体质,有P<0.05,明显差异,P<0.05,有统计学意义。肾虚证候组比肾虚体质组唾液胱抑素C、β2-MG的浓度值略高一些,但无明显差异,P>0.05,无统计学意义。肾虚证候干预组比肾虚体质组的唾液胱抑素C、β2-MG的值略高,且体质干预组倾向于正常对照组,其P>0.05,无显著差异,无统计学意义。③肾脏组织形态与HE染色检测:与正常对照组相比,肾虚体质组与肾虚证候组的肾体重与肾指数明显降低,有统计学意义(P<0.05);中药六味地黄丸肾虚干预组与肾虚证候组相对于肾虚体质组与肾虚证候来说,肾重与指数升高,具有统计学意义(P<0.05);肾虚体质组与肾虚证候组虽有差异,但无统计学意义(P>0.05)。肾脏组织经石蜡HE染色发现,正常对照组肾脏组织多表现为正常肾脏,肾虚体质组大鼠少量肾小球轻度萎缩,肾小球数目变化不大。肾虚体质干预组多表现为正常肾脏,组织呈正常。肾虚证候组中肾小球大小形态与数量变化大,数量明显减少,肾脏组织出现不同程度的肿胀瘀血。肾虚证候干预组大鼠肾小球轻度萎缩,肾小球数目未见明显减少。
结论:
基于内经“恐伤肾”理论建立先天不足肾虚体质实验动物模型;采用当前较为成熟的方案,应用氢化可的松注射建立肾虚证候(肾阴虚证)实验动物模型,突出中医特色。研究发现肾虚体质与肾虚证候大鼠不仅体重减轻,行为能力下降,肾小球组织结构变化,唾液胱抑素C、β2-MG含量升高,与肾功能损伤程度可能具有很大相关性;中药六味地黄丸可修复肾组织,降低唾液胱抑素C、β2-MG含量,同时改善肾虚体质与肾虚证候大鼠因肾功能受损而出现的各类症状。