论文部分内容阅读
棉粕作为动物一种很好的蛋白饲料来源而进行了大量的研究,目前的研究主要集中在脱毒菌种的筛选、发酵前后常规养分变化及其发酵参数和工艺的优化等方面,本文将基于液相色谱—质谱(LC-MS)的代谢组学方法研究不同棉粕源发酵饲料对黄羽肉鸡血浆小分子代谢物的影响.选取健康的45日龄黄羽肉鸡96只,按照公母各半,体重相近的原则,随机分为4组,即对照组(CG)、假丝酵母组(CT)、酿酒酵母组(SC)、复合发酵组(CF),每组4个重复,每个重复6只鸡,饲喂期为14天；对照组饲喂基础日粮,CT、SC、CF分别在基础日粮中按照6％添加热带假丝酵母发酵饲料、酿酒酵母发酵饲料、热带假丝酵母与酿酒酵母复合菌种发酵饲料(热∶酿=3∶7).饲喂结束后,每组各个重复随机抽取2只鸡(即每个处理共8只鸡),空腹12h后肝素抗凝,心脏采血,所得血浆进行LCMS分析,正离子扫描分子质量范围为50～1 000的小分子物质.LC-MS分析得到的鸡血浆数据,通过Analyst 1.4.2、Markerview 1.1软件的转化、峰识别、峰匹配等步骤得到有效可用的数据分析源,对所得数据采用SIMCA-P+11.5软件进行偏最小二乘法—判别分析(PLS-DA)方法进行模式识别和差异代谢物提取.鉴于所得代谢物变量较多,本文只对模型的变量重要性投影值(VIP值,原则要求VIP＞1.5)前40个变量的保留时间(tR)和质荷比(m/z)所对应的化合物作为候选潜在差异代谢物,对所选的40个变量采用SPSS 16.0进行两组间T检验,选取P＜0.05的变量,剔除信号太低的峰,同时剔除在S图(S-Plot)中出现相关系数及过大置信区间的变量,最后将得到的变量按照m/z经METLIN、HMDB、KEEG、LIPD MAPS等数据库检索、文献对照等方法对差异代谢物进行指认.结果表明：各组间血浆PLS-DA得分图显示对照组与试验组间无明显交叉和重叠,且明显地分为4类,即CG、CT、SC、CF各组能够明显的区分开,提示各组间血浆代谢物存在显著差异；与CG组相比,各试验组血浆代谢物总离子强度表现出差异变化,这种变化主要体现在保留时间为8 ～ 17.5min的代谢物,尤其是13～ 17.5min的代谢物,发生变化的代谢物主要为磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、胆固醇酯(CE)、鞘磷脂(SM)、甘油二酯(DG)、甘油三酯(TG),较CG组均极显著上调(P＜0.01).结论：棉粕源发酵饲料的添加对鸡的代谢状态产生了一定的影响,鸡血浆代谢物产生了显著变化,这种变化主要表现在血浆中脂类代谢物的增加.