【摘 要】
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[目的]本研究拟探索符合"3R"原则的临床前药物皮肤致敏试验的替代方法,根据OECD指导原则LLNA： BrdU-ELISA法(442B),建立敏感度、准确率高并可在致敏诱导期检测化学品致敏
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]本研究拟探索符合"3R"原则的临床前药物皮肤致敏试验的替代方法,根据OECD指导原则LLNA： BrdU-ELISA法(442B),建立敏感度、准确率高并可在致敏诱导期检测化学品致敏性的皮肤致敏试验方法.通过ELISA法、荧光定量PCR法、流式细胞术观察致敏诱导期小鼠血清生化指标、脾脏中致敏基因以及引流淋巴结淋巴细胞膜表面分子的变化情况,探讨在致敏诱导期检测致敏性的机制.[材料和方法]选择丁子香酚与α-已基肉桂醛作为阳性致敏物,建立试验方法,分别选择2,4-二硝基氯苯、2-巯基苯并噻唑、戊二醛作为致敏阳性物,甘油、氯化钾、乙醇作为致敏阴性物,验证试验方法的稳定性和重复性；采用ELISA法检测不同处理动物血清中组胺、IL-2、IL-4的水平；应用荧光定量PCR方法,检测测试动物脾脏致敏相关基因T-bet、CTLA4、foxp3的差异表达,研究小鼠脾脏中三种致敏相关基因的差异表达；应用流式细胞术,检测小鼠淋巴细胞悬液中的淋巴细胞亚群变化以及与致敏相关的CD154、CD28、CD69细胞表面分子变化情况.[结果]成功在本实验室建立了稳定、重复性好的LLNA： BrdU-ELISA方法.ELISA法检测小鼠的血液生化指针结果显示,各致敏阳性组小鼠血清中的His、IL-4水平均增加,IL-2无明显变化,其中IL-4水平显著变化；RT-PCR结果显示：致敏阳性组小鼠脾脏中T-bet基因表达量升高,其中丁子香酚组、α-己基肉桂醛组、DNCB组的增加量与溶剂对照组相比差异性显著.但CTLA4、foxp基因的表达量无明显变化；流式细胞术结果显示：小鼠淋巴结中CD4+T细胞数量比例与溶剂对照组相比显著增多.CD28的表达量均增多,其中戊二醛组与2-巯基苯并噻唑组与溶剂对照组相比差异性显著.[结论]本实验室成功建立LLNA： BrdU-ELISA方法,可以选用ELISA试剂盒检测血清中IL-4水平为辅助指标.小鼠脾脏中T-bet基因表达量升高、小鼠淋巴结中T细胞数量与CD4阳性T细胞数量比例增多,表明了皮肤过敏反应是由T细胞介导的迟发型变态反应.
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