【摘 要】
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[目的]研究不同浓度与不同作用时间条件下,赭曲霉毒素A (OTA)对鼠巨噬细胞ANA-1的毒性损伤作用效应与机制.[材料和方法]以鼠源巨噬细胞ANA-1为模型,在96孔培养板中,分别
【机 构】
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中国农业科学与农业质量标准与检测技术研究所国家饲料质量监督检验中心(北京)农业部农产品质量安全研究重点实验室,北京100081
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]研究不同浓度与不同作用时间条件下,赭曲霉毒素A (OTA)对鼠巨噬细胞ANA-1的毒性损伤作用效应与机制.[材料和方法]以鼠源巨噬细胞ANA-1为模型,在96孔培养板中,分别加入不同浓度(0～150μM) OTA并作用12、24、36和48h,分析OTA对ANA-1的细胞活性的影响,同时在24孔板中,将不同浓度OTA作用于ANA-1 36h后,用Trypan blue染色计数活细胞数；ANA-1接种于24孔培养板中,与不同浓度OTA (0～31.6μM)共同孵育24h,细胞固定于70％乙醇后,分别进行PI单染和Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪分析分析OTA对ANA-1细胞周期分布的影响及其诱导的细胞凋亡效应.[结果]不同浓度OTA作用于ANA-1后,呈明显的"量-时-效"毒性效应,影响ANA-1细胞活性,造成细胞损伤,其毒性效应与OTA的作用剂量、作用时间呈正相关,OTA作用ANA-1 24h后其IC50为23μM； Trypan blue染色实验结果也表明,随着OTA作用浓度的增加(0～31.6μM),ANA-1活细胞数量显著降低；PI单染结果显示,OTA作用于ANA-1后,Sub-G1期的ANA-1从6％(0μM)显著增加至46％ (20μM),表明OTA作用于ANA-1后可能诱导细胞凋亡；20 μM OTA能够显著降低G2/M期细胞数量；当OTA作用浓度为10～31.6μM时,G1和G2/M期比例下降,S期细胞比例增加至37％； Annexin V-FITC/PI双染结果表明,随着OTA作用浓度的增加,早期细胞凋亡(AV+/PI-)从5％ (0μM)增加至25％(20μM),晚期细胞凋亡(AV+/PI+)也显著增加,PI单染和AV/PI双染结果一致；结果表明,OTA作用于ANA-1后能够诱导细胞凋亡(9％至90％).[结论]赭曲霉毒素A作用于ANA-1后,能够造成细胞毒性损伤,并诱导细胞凋亡,其毒性作用效应呈明显的"量-时-效"正相关.
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