【摘 要】
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[目的]黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的肝细胞毒性和肝致癌作用与CYPs代谢形成8,9-环氧化物有关.我们采用来源于人肝祖细胞系的HepaRG细胞分化成肝样细胞,可保留许多原代肝细胞
【机 构】
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厦门大学分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院,厦门361102
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]黄曲霉毒素B1(AFB1)诱导的肝细胞毒性和肝致癌作用与CYPs代谢形成8,9-环氧化物有关.我们采用来源于人肝祖细胞系的HepaRG细胞分化成肝样细胞,可保留许多原代肝细胞的代谢特征.本课题拟探讨HepaRG细胞作为模型进行AFB1诱导肝细胞毒性损伤的研究.[材料和方法]采用DMSO诱导HepaRG细胞分化、以及传代恢复培养,进行细胞形态学观察,qRT-PCR检测肝细胞表型、代谢酶等特征标志物的mRNA水平；给予0.3125-80μM的AFB1处理未分化和分化的HepaRG细胞24h,MTT实验观察细胞生长活力/增殖功能,并与肝L02细胞相比较；选取1和10μM AFB1处理分化HepaRG细胞建立暴露模型、及其撤除AFB1修复24h模型,LDH释放试验检测细胞膜损伤、qRT-PCR检测mRNA水平.[结果]本研究发现：(1)诱导后HepaRG细胞形态学观察可见成熟肝细胞样的颗粒状细胞和典型的胆小管样结构的细胞,细胞中KRT19、ALB、HNF4A、CYP1A2、CYP3A4等基因mRNA水平分别增高4～600倍；消化传代培养的诱导分化HepaRG细胞中肝细胞特征和标志物可以随时间(48h后)恢复；(2)AFB1处理组分化HepaRG细胞增殖抑制呈剂量依赖性增高(P＜0.05),且敏感性显著高于L02细胞(IC50降低)；(3)AFB1处理组分化或未分化HepaRG细胞LDH漏出明显增高(P＜0.05)； CYPs家族mRNA水平显著降低(P＜0.05)、甚至降低至未分化水平,且撤除AFB1处理24h后HepaRG细胞中CYPs基因mRNA水平未见恢复(P＞0.05).[结论]成功建立肝HepaRG细胞的诱导分化和获取传代培养成熟肝细胞；具有代谢酶活性的分化HepaRG细胞对AFB1诱导毒作用敏感性增高,且AFB1抑制肝细胞的损伤修复,与诱导肝细胞死亡转归有关.提示诱导分化的HepaRG细胞可应用于模拟AFB1暴露诱导人体肝毒性效应的研究.
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