论文部分内容阅读
[目的]以诱导后的人神经母细胞瘤NB-1细胞构建神经元突触损伤的体外模型,探讨丙烯酰胺(acrylamide,ACR)对神经突触损伤的可能机理.[材料和方法]将NB-1细胞通过二丁酰环腺苷酸(db-cAMP)诱导为成熟神经元后,MTT法检测ACR不同剂量(0、25、50、100、150、200和250 μg/ml)和不同染毒时间(24、48和72小时)对NB-1细胞相对存活率的影响,Western-blot法检测神经元突触损伤前后突触素Ⅰ(Synapsin Ⅰ)磷酸化和非磷酸化蛋白表达的变化,光学显微镜和电子显微镜记录神经元突触损伤前后的形态变化,免疫共沉淀试验确定神经元突触损伤前后N-甲基马来酰胺敏感因子(NSF)附着蛋白受体(SNARE)的结合/解离变化,并使用Spearman对其进行相关性分析.[结果]根据MTT试验结果确定ACR染毒剂量为0、25、50、100 μg/ml,染毒时间为48小时；随ACR染毒剂量的增加Synapsin Ⅰ磷酸化和非磷酸化蛋白表达降低,在25 μg/ml染毒剂量下可见兴奋性和抑制性神经递质,在50 μg/ml染毒剂量下可见抑制性递质；25μg/ml ACR染毒剂量下观察到清亮球形突触小泡和含有高电子密度的致密颗粒的突触小泡；50μg/ml ACR染毒剂量下观察到含有高电子密度的致密颗粒的突触小泡；ACR损伤NB-1细胞后,SNARE复合体中syntaxin和SNAP-25结合状态与Synapsin Ⅰ、磷酸化Synapsin Ⅰ(P-Synapsin Ⅰ)蛋白表达呈正相关(Spearman相关系数r分别为0.897和0.935),与P-Synapsin Ⅰ/Synapsin Ⅰ差异性表达呈负相关(Spearman相关系数r为-0.250).[结论]ACR对NB-1细胞突触损伤后SNARE复合体中syntaxin和SNAP-25的结合状态与Synapsin Ⅰ、P-Synapsin Ⅰ蛋白表达降低呈正相关,与P-Synapsin Ⅰ/Synapsin Ⅰ差异性表达呈负相关,突触内特异性神经递质的传递和释放可能与P-SynapsinⅠ/ Synapsin Ⅰ差异性表达所调控的SNARE复合体的解离状态导致的突触功能损伤相关.