体内Pig-a基因突变试验联合微核实验和彗星实验检测化合物的遗传毒性研究

• 作 者: 陈高峰[1]文海若[2]宋捷[2]王伟凡[2]杨莹[2]齐乃松[2]毛志慧[1]黄芝瑛[3]王雪[1]
• 机 构: 中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心,北京100176
• 出 处: 中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
• 发表日期: 2015年期

　　[目的]：考察体内Pig-a基因突变试验高通量方法联合微核实验和彗星实验检测化合物遗传毒性的可行性,并且结合短期或长期的一般毒性研究,探讨将基因突变、染色体断裂和DNA损伤三个不同遗传终点结合到大鼠短期或长期重复给药毒性研究中.[方法]研究采用6～7周龄SD大鼠,连续3天或28天经口灌胃临床用抗肿瘤药盐酸丙卡巴肼(Procarbazine hydrochloride,PCZ)或乌拉坦(Ethyl carbamate,EC),观察大鼠产生的一般毒性和遗传毒性反应及其严重程度,主要毒性靶器官及损害的可逆程度.以3天连续给药和28天重复给药两种方案将128只动物各分为6组(共12组)：溶媒对照组、盐酸丙卡巴肼低剂量组、盐酸丙卡巴肼高剂量组、乌拉坦低剂量组、乌拉坦高剂量组和ENU阳性对照组,每组又分为主实验组和彗星实验组,主实验组动物用于pig-a基因突变试验的研究,而彗星实验组动物用于微核试验和彗星试验的研究.给药方式为经口灌胃,给药体积10 mL/kg,给药频度为每天1次.给药结束后,3天连续给药组设置6周恢复期,28天重复给药组设置4周恢复期.实验期间和恢复期期间观察动物的临床症状；对28天重复给药组动物进行体重和摄食量测定以及血液学、血清生化和尿常规等指标检测.3天连续给药主实验组于实验前以及实验第15、30和45天采血进行外周血Pig-a基因突变率检测；而28天重复给药主实验组于实验前以及实验第15、29、43和57天采血进行外周血Pig-a基因突变率检测.3天连续给药彗星实验组于实验第4天额外给予1次药,3小时后解剖,采集肝、肺和肾以及血液与骨髓,分别进行外周血微核与骨髓微核试验以及外周血和脏器彗星试验,并且固定肝、肺和肾进行组织病理学检查；恢复期结束对主实验组动物实施安乐死.28天重复给药彗星实验组于实验第4天给药后3小时采血进行外周血微核试验和彗星试验,于实验第29天额外给予1次药,3小时后解剖,采集肝、肺和肾以及血液与骨髓,分别进行外周血微核与骨髓微核试验以及外周血和脏器彗星试验；而主实验组于恢复期结束解剖.对28天重复给药组所有解剖动物进行骨髓细胞分类计数、大体病理学检查和组织病理学检查.