【摘 要】
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[目的]观察永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)经香烟烟雾长期染毒后FHIT基因甲基化状况及其mRNA表达改变,探索吸烟致肺癌的机制.[材料和方法]选取永生化人支气管上皮细胞(
【机 构】
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苏州大学医学部公共卫生学院,苏州215123
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
论文部分内容阅读
[目的]观察永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)经香烟烟雾长期染毒后FHIT基因甲基化状况及其mRNA表达改变,探索吸烟致肺癌的机制.[材料和方法]选取永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)作为受试细胞,用含10％胎牛血清的DMEM培养基于37℃、5％ CO2培养箱中培养,每4天传代1次.细胞设立对照组(C组)和烟雾染毒组(Sm组).取对数生长期细胞制备单细胞悬液,以每孔1×105接种于Transwell培养皿中,每个Transwell皿中加入1.5ml培养基,置于培养箱中培养,24h后将Transwell培养皿置于细胞气体染毒装置中,Transwell膜上方持续泵入香烟烟雾直接对细胞进行染毒,膜下方通入培养基保持细胞湿润.染烟组烟雾浓度为20％,每次染烟10min,对照组烟雾浓度为0％,其余条件同染烟组.第2天重复染烟一次,细胞连续染烟2次作为染烟1代(记作Sm1).收集细胞常规培养,待细胞生长至对数期取部分细胞进行下一代染烟,其余细胞继续常规培养及传代,共染烟30代,传代40代(即Sm30-40).经长期香烟烟雾染毒后,应用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡法及软琼脂克隆法检测克隆形成率判断其恶性转化程度,用甲基化特异性PCR (MS-PCR)检测FHIT基因甲基化状况,并通过Q-PCR检测FHIT的mRNA表达量. [结果]与对照组细胞相比,各染烟组细胞出现了一定的S期阻滞,染烟后传代至40代细胞凋亡率较对照组下降明显(p＜0.05).染烟20代传代至40代细胞(Sm20-40)与染烟30代传代至40代细胞(Sm30-40) FHIT基因启动子区呈高甲基化状态,且Q-PCR结果显示Sm20-40和Sm30-40组细胞FHIT基因mRNA均低于对照组(p＜0.05).[结论]香烟烟雾可导致BEAS-2B细胞FHIT基因启动子区呈高甲基化状态,引起FHIT基因mRNA表达降低,可能是吸烟致肺癌的机制之一.
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