【摘 要】
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[目的]探讨聚-ADP-核糖水解酶(PARG)基因沉默在苯并芘(BaP)诱导细胞甲基化水平改变中的作用及可能机制,为化学致癌的防治提供新的思路.[材料和方法]利用PARG基因缺陷人支气管上皮细胞(16HBE细胞)作为研究对象,通过检测BaP诱导人正常16HBE细胞及其PARG缺陷细胞(shPARG细胞)恶性转化过程中细胞基因组DNA整体甲基化水平、DNA甲基化酶的表达等指标的变化,比较两种细胞在B
【机 构】
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深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室,深圳518055 中山大学公共卫生学院,广州51008
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]探讨聚-ADP-核糖水解酶(PARG)基因沉默在苯并芘(BaP)诱导细胞甲基化水平改变中的作用及可能机制,为化学致癌的防治提供新的思路.[材料和方法]利用PARG基因缺陷人支气管上皮细胞(16HBE细胞)作为研究对象,通过检测BaP诱导人正常16HBE细胞及其PARG缺陷细胞(shPARG细胞)恶性转化过程中细胞基因组DNA整体甲基化水平、DNA甲基化酶的表达等指标的变化,比较两种细胞在BaP作用后DNA甲基化水平变化的差异,分析PARG基因沉默对DNA甲基化水平的影响；并进一步利用MeDIP-sequence技术筛选和分析特异甲基化基因,从分子水平上探讨PARG基因沉默在BaP致癌过程中的作用及可能机制.[结果]1、正常16HBE细胞经BaP梯度染毒处理1w,9w,15w后,荧光强度逐渐减弱,且随着染毒剂量的增加,染毒时间的延长,这种趋势更加明显；而BaP染毒处理的shPARG细胞中荧光强度变化不明显.高效毛细管电泳技术(HPCE)定量分析0、10、20、40μM BaP染毒15w后两种细胞的基因组DNA整体甲基化水平,结果发现各组甲基化率的变化趋势基本与免疫荧光分析一致.其中：正常16HBE细胞中,0、10、20、40μM剂量组甲基化率分别为43.10±0.13％、42.5±0.10％、29.91±0.10％；而shPARG细胞分别为45.23±0.27％、53.70±0.15％、57.08±0.07％.2、正常16HBE细胞中,DNMT1随着BaP染毒剂量的增加和染毒时间的延长呈现表达逐渐降低的趋势；在BaP处理1w、9w时,两种细胞内均未见MBD2、DNMT3b酶的表达改变；BaP染毒处理15w时,shPARG细胞中DNMT3b、MBD2的表达随着BaP染毒剂量的增加而逐渐增高,但正常16HBE细胞未见明显变化.3、通过分析两种细胞的MeDIP测序数据,发现基因EGFR、EGF、SOS1、UBA3、MAPK10、WNT2b、WNT5b可能参与BaP致癌,它们涉及的关键通路有：EGF受体信号通路、MAPK信号通路、Wnt信号通路以及泛素化介导的蛋白水解.[结论]BaP诱导16HBE细胞发生恶性转化过程中,EGF受体信号通路及Wnt信号通路可能发生活化,促进肿瘤的发生；而PARG基因沉默可通过调节泛素化水解过程,抑制EGF受体信号通路及Wnt信号通路的活化,抑制BaP的致癌过程.
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