【摘 要】
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目的：羊膜因其特殊的组织结构,富含Ⅳ胶、生长因子和细胞因子等成份备受临床和基础研究者的关注.我们这篇研究通过采用低温粉碎的方法制备羊膜微粒,将其应用到糖尿病难愈
【机 构】
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中国人民解放军总医院基础医学研究所生化室,北京100853
【出 处】
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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会
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目的：羊膜因其特殊的组织结构,富含Ⅳ胶、生长因子和细胞因子等成份备受临床和基础研究者的关注.我们这篇研究通过采用低温粉碎的方法制备羊膜微粒,将其应用到糖尿病难愈合性创面,观察其对创面愈合的影响,并进一步探究其潜在的机制.方法：实验采用0.25％胰酶联合DNA酶处理的方法对收集的羊膜组织进行脱细胞处理,并进一步利用低温星球式研磨机(液氮制冷)QM-DY2将冷冻干燥的羊膜进行粉碎以获得大量的去细胞羊膜微粒.并应用于糖尿病小鼠背部全层皮肤缺损创面,通过创面大体观察、HE染色、马松染色、人和小鼠Ⅳ胶原蛋白免疫荧光共定位等,观察去细胞羊膜微粒对糖尿病难愈合创面的影响.结果：首先,低温粉碎的羊膜微粒大小在5-30um之间,进一步通过CBA磁珠定量的方法发现正常羊膜微粒和去细胞羊膜微粒浸提液中VEGF、Basic FGF、TGF-β1、MCP-1等生长因子含量并未明显降低.应用于糖尿病小鼠创面后,第14天观察发现能显著减小创面面积(完整羊膜微粒组：27.325±2.813；去细胞羊膜微粒组：25.327±3.142；空白对照组：52.218±7.138,p＜0.01),增加创缘血管的密度(去细胞羊膜微粒组：1 12±10.512；完整羊膜微粒组：102±9.435；空白对照组：52±4.268,p＜0.01)；病理学分析可见,完整羊膜微粒组和去细胞羊膜微粒组小鼠皮内结构规则、胶原蛋白沉积显著减少,并且微粒人胶原蛋白能够很好的和新生的鼠胶原蛋白融合.结论：低温粉碎的去细胞羊膜微粒富含多种促愈合生长因子和细胞因子成分,能够显著促进糖尿病难愈合创面的愈合,可以作为一种潜在的治疗难愈合创面的新型生物工程材料.
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