【摘 要】
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背景：细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)是由组织细胞分泌的蛋白质及多糖等成分组成,不同组织来源的ECM在成分及结构上有一定差异,这些细微差异可能直接影响ECM支架对
【机 构】
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四川大学华西医院乳腺外科 四川省成都市武侯区国学巷37号四川大学华西医院,610041
【出 处】
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首届全国组织修复与再生医学大会暨国际组织修复与再生医学学术研讨会
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背景：细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)是由组织细胞分泌的蛋白质及多糖等成分组成,不同组织来源的ECM在成分及结构上有一定差异,这些细微差异可能直接影响ECM支架对细胞行为的支持引导作用.本实验制备脂肪源无细胞基质水凝胶(Hydrogel from Acellular Porcine Adipose tissue,HAPA),并以与其主要成分及理化特性相似的Ⅰ型胶原水凝胶为对照,探讨HAPA是否具有脂肪组织再生诱导特性.方法：采用匀浆-球磨联合化学脱细胞法制备猪脂肪组织无细胞基质材料(Decellular Porcine Adipose Tissue,DPAT),以DNA定量、油红O染色等方法初步评价其脱细胞脱脂效果.以DPAT为基础通过盐酸胃蛋白酶溶解法制备HAPA.体外成脂分化实验分别使用DMEM/F12完全培养基(阴性对照组)、含HAPA的条件培养基(实验组)及成脂诱导培养基(阳性对照组)培养第三代脂肪来源干细胞(Adipose derived stem cells,ADSCs) 14天后行油红O染色,观察细胞内成脂分化情况.动物实验以Ⅰ型胶原水凝胶为对照,根据是否添加未预成脂诱导的ADSCs为标准(2.5×105个/只)分为复合细胞A组(HAPA+ADSCs)、复合细胞B组(胶原水凝胶+ADSCs)、单纯材料A组(HAPA)、单纯材料B组(胶原水凝胶).将四组水凝胶-细胞复合物或单纯水凝胶1ml分别经注射器注入裸鼠皮下,于第1周、第2周、第4周取材行冰冻切片染色,评价植入物内脂肪形成情况.结果：HE染色及DAPI染色显示DPAT内无残余细胞核,残余DNA含量为4.01ng/mg,油红O染色未见红染的油脂成分.含HAPA的条件培养基孵育培养ADSCs14天后可见细胞内含大量红染脂滴,阳性对照组也可见阳性脂滴存在,而阴性对照组未加任何成脂分化迹象.动物实验将HAPA与ADSCs复合物皮下注射2周即可见移植复合物内有红染的脂肪细胞,单纯的HAPA植入裸鼠皮下亦可见移植物内出现红染的脂肪新生.而Ⅰ型胶原水凝胶无论是否复合ADSCs,体内植入4周未见均任何成脂现象.结论：脂肪源水凝胶HAPA能定向诱导ADSCs自发成脂分化.更重要的是,在无外源性种子细胞添加的前提下,HAPA具有原位诱导脂肪新生的特性.
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