【摘 要】
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目的：探索毕赤酵母组成型启动子PGCW14和PAOX1-PGCW14双启动子在HPV18 L1蛋白表达中的应用。方法：构建重组质粒PGCW14-HPVl8 L1和PAOX1-HPV18 Ll-PGCW14-HPVl8 L1,通过电转
【出 处】
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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会
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目的：探索毕赤酵母组成型启动子PGCW14和PAOX1-PGCW14双启动子在HPV18 L1蛋白表达中的应用。方法：构建重组质粒PGCW14-HPVl8 L1和PAOX1-HPV18 Ll-PGCW14-HPVl8 L1,通过电转获得重组KM71菌株,并用Western blot筛选阳性克隆比较不同启动子类型HPV18 L1蛋白的表达量；选取三种型别重组菌株高表达的单克隆进行SL摇瓶培养,每24小时取样,通过Western blot 比较不同时间点的表达量差异。结果：(1)成功构建重组质粒PGCW14-HPVl8 L1和PAox1-HPV18 Ll-PGCW14-HPVl8 L1；(2)筛选得到相应阳性重组KM71菌株；(3)5L摇瓶培养显示PGCW14型别重组菌株的表达量相当甚至高于PAOX1型别重组菌株,双启动子重组菌株的表达量相比于其他两种没有明显优势。结论：(1)成功利用新型组成型启动子PGCW14和PAOX1-PGCW14双启动子表达HPV18 L1蛋白；(2)新型组成型启动子PGCW14提供了一个可以代替PAOX1启动子表达外源蛋白的有效选择,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。
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