【摘 要】
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目的：克隆重组RSV A型Long株人呼吸道合胞病毒(HRSV)截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性.方法：采用RT-PCR方法克隆RSV F1截短蛋白序列,克隆至pET28质粒表达载体,构建重组原
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,昆明650118
【出 处】
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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会
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目的：克隆重组RSV A型Long株人呼吸道合胞病毒(HRSV)截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性.方法：采用RT-PCR方法克隆RSV F1截短蛋白序列,克隆至pET28质粒表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blots鉴定后,用Ni亲和层析柱进行纯化.重组蛋白免疫ICR小鼠,用ELISA方法检测血清抗体效价,进行其免疫原性评价.结果：重组的原核表达质粒经双酶切及测序证明构建成功；表达的F1融合性蛋白片段大小1 104 bp,表达的蛋白大约368个氨基酸,其相对分子量为44 KDa.表达的F1融合性蛋白以包涵体形式存在,纯化后蛋白纯度达90％.重组F1蛋白免疫小鼠效价最高可达1：4 096.结论：原核表达的重组RSV F1蛋白免疫原性好,为单克隆抗体的制备及检测试剂盒的研究奠定基础.
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