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摘要：目的：采用PCR技术对常见细菌进行检测，并观察分析其检测应用的效果。
方法：回顾分析法是对本研究中几种常见细菌的PCR检测结果进行分析、回顾的一种方法。文章采用这种方法对本研究中随机选取的1组案例进行资料分析，探讨PCR检测技术在肠道致病菌检测效果的运用，从而体现PCR技术在常见细菌中检测的优势，提高人体的生命健康。
结果：采用PCR检测技术发现肠道中常见致病细菌一般为沙门氏菌属、大肠埃希菌属与金黄色葡萄球菌等。
结论：PCR检测技术能够实时检测出细菌分布、存在的阳性率，并根据此判断患者染病的致病机制以及流行学特点，起到了有效预防、控制的效果。
关键词：PCR检测技术常见细菌运用
【中图分类号】R9【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2013）03-0289-02
PCR检测技术是一种聚合酶链反应，其采用变性——退火——延伸三个步骤使DNA基因能够在体外实现解旋解链，类似于一种体外增加、复制形式。PCR技术在1971年由Khorana提出，将DNA进行变形后，与合适的引物进行杂交，并将引物利用DNA聚合酶延伸出来，重复循环该过程使tRNA基因克隆出来。在1985年，PCR技术正式为人们所认可，由此，聚合酶链反应正式实现了细胞内的DNA复制。PCR检测技术在1989年成为重大科学发明，其对于细菌的检测过程中具有重复性好、特异性强、操作简单、稳定性好等优势，逐渐成为检测常见细菌的主要方式，对于人们疾病的预防与防治具有十分重要的作用。
1一般资料与方法
1.1一般资料。本研究采用最为常见的革兰氏阴性杆菌中的埃希菌属、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌属等作为研究方向，采用PCR技术对肠道中的致病菌进行检测，并观察其结果，探讨PCR技术在常见细菌中检测的优势，提高人体预防与防治的效果。
案例资料（食物中毒、突发爆发性腹泻患者中的常见菌群）：
在公共突发事件发生时，肠道致病菌是诱发患者病发腹泻、中毒等的主要原因。肠道致病菌存在的主要原因在于食品污染，而化学性污染、物理性污染以及生物性污染均属于食品污染的形式。
在本研究中案例显示的食物污染形式为生物性污染，当患者感染致病性细菌时，其均出现发烧症状、中毒症状等，这均与食品中细菌的繁殖有关。沙门氏菌属、志贺氏菌菌属、大肠埃希菌属、金黄色葡萄球菌属均属于食品中的肠道致病菌。
本研究采用PCR检测方法对食品中的细菌进行检测，并判断相关检测结果对患者预防、治愈成功率的影响。
1.2方法。
1.2.1公共突发事件中的常见菌群试验标准。选取试验对象：从当地医院急诊科中选择食物中毒、食源性腹泻患者40例。在选取的对象中男性有22例，女性有18例，年龄在32～85岁之间，平均年龄为（59.12±3.21）岁。
对象排除标准：经过局部或全身使用抗生素或激素治疗的患者除外。
试剂与仪器的选择：采用标准菌株、荧光定量PCR试剂盒、iQTN荧光定量PCR仪、ASP-3700紫外光/可见光分光光度计、Biospin细菌基因组DNA提取试剂盒作为试剂与仪器的选择[2]。
1.2.2公共突发事件中的常见菌群试验方法。
1.2.2.1治疗、检查。对入院治疗的患者予以抗生素治疗，提高患者自身免疫力。
对引起食物中毒、爆发腹泻的场所、食物等进行快速检测，一般情况下采用半自动化辅助仪器对病发区食品进行检测，并提高检测的反应速度以及提高处理样品量的能力。本研究中心采用PCR检测技术，实现了一次性扩增，将多种微生物检测出来，实现了检测的多重性。因此在检查过程中发现感染患者的污染食品区有三处，感染传播途径为水和食物。
控制感染源并截断感染途径，从而减少病患人数，防止患者二度感染。
1.2.2.2样本采集。采取现场的可疑食物及患者的呕吐物、粪便，将样本增菌后提取DNA并放入零下20℃的环境中进行保存待用。
1.2.2.3提取标准菌株DNA。采用Biospin细菌基因组DNA提取试剂盒进行标准菌株基因组DNA的提取，并将其放入零下20℃的环境中进行保存[3]。
1.2.2.5制备标准品。观察不同菌株以及菌株特异性引物的PCR检测过程中的反应，对产物进行切胶与回收，提取其DNA片段，并将其作为进行定量的标准品。
采用PCR检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌志贺氏菌等以及细菌通用引物，并观察其反应，将制成的标准本作为检测细菌总量的标准品。其中金黄色葡萄球菌曾引发日本血印奶粉金黄色葡萄球菌肠毒素事件，因此在制作标准品时应该予以重视。
1.2.2.6制作标准曲线。ASP-3700紫外光/可见光分光光度计对制成的标准品DNA的浓度进行测定，并计算标准品的复制数，采用无菌双蒸水对标准品的回收产物进行成倍配比稀释，饭后观察测定的PCR反应，建立Ct值，制作与其浓度值相对应的标准曲线。
1.2.2.7观察待测样本的PCR反应。对待测样本的DBA分别与各种细菌种属的特异性引物实施PCR扩增，并进行测序。
1.2.2.8采用PCR检测金黄色葡萄球菌阳性样本的耐药性。观测待测样本PCR的常规反应，确定金黄色葡萄球菌的耐药属性[4]。
1.3统计学分析。首先进行数据分析，选用的软件为SPSS17.0。其次采用假设检验方法即卡方检验进行计数资料的对比应用。再次应用Student t检测方法进行计量资料的对比应用。最后检测P值，如果P值<0.05，那么数据之间存在差异性，说明其具有统计学意义。
2结果
2.1案例治疗结果。经本研究试验中患者无二度感染现象。 2.2标准曲线。进行标准曲线的制定，其中横坐标为标准品复制数的浓度对数，纵坐标为Ct值，通过平面坐标获得通用引物以及各细菌的种属。从试验结构来看，模板的浓度与Ct值具有相关性，系数维持在0.91～1.04之间。
2.3常规PCR反应。通过观察试验结果，发现所有的通用引物以及样本中PCR反应均显示样本中存在细菌。
3讨论
从实验结果可以看出，存在于肠道中的致病细菌多为沙门氏菌属、大肠埃希菌属与金黄色葡萄球菌等，这些致病因素影响着患者病情痊愈的程度[5]，对患者病情控制具有一定的影响。因此，要对病菌感染源以及传播途径进行控制，并争取治疗的时间，应需要首先采用PCR检测的方法，选择能够覆盖最多细菌种属的通用引物，并作出预后分析[6]。
在其他常见病菌的检测中，也可以应用PCR检测技术，其检测标准与步骤与案例中检验方法类似，通过PCR检测可以有效发现患者病症中的常见细菌，并予以消除，就有高灵敏性、高精确性等临床实践优势[7]。
目前，PCR技术在细菌、病毒、寄生虫检测中取得了良好的研究成果，并将其技术研究应用到其他领域中，以求更大的发展。
参考文献
[1]李昌崇，林立.儿童下呼吸道感染常见细菌病原分布及耐药现状[J].临床儿科杂志，2010，28（2）：106-111
[2]邓冠华，郑璇，胡一敏等.应用基因芯片快速检测临床常见细菌[J].中华检验医学杂志，2011，34（11）：1012-1016
[3]李晓婕，黄绍华.临床常见细菌和ICU院内感染病原菌分布及耐药性的对比分析[J].重庆医学，2011，40（1）：59-61
[4]朱飞舟，陈利玉，刘新发等.10种常见细菌基因检测膜条的研制[J].微生物学杂志，2011，31（4）：58-63
[5]黄卫春，张蓓，徐中等.3812株临床常见细菌耐药性分析[J].检验医学，2010，25（5）：387-390
[6]张文兰，胡同平，王树平等.包头临床常见细菌的耐药性监测[J].中国抗生素杂志，2009，34（4）：204
[7]卓超，黄文祥，郑行萍等.2004～2005年我院临床常见细菌耐药性监测[J].中国抗生素杂志，2007，32（5）：308-312
方法：回顾分析法是对本研究中几种常见细菌的PCR检测结果进行分析、回顾的一种方法。文章采用这种方法对本研究中随机选取的1组案例进行资料分析，探讨PCR检测技术在肠道致病菌检测效果的运用，从而体现PCR技术在常见细菌中检测的优势，提高人体的生命健康。
结果：采用PCR检测技术发现肠道中常见致病细菌一般为沙门氏菌属、大肠埃希菌属与金黄色葡萄球菌等。
结论：PCR检测技术能够实时检测出细菌分布、存在的阳性率，并根据此判断患者染病的致病机制以及流行学特点，起到了有效预防、控制的效果。
关键词：PCR检测技术常见细菌运用
【中图分类号】R9【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2013）03-0289-02
PCR检测技术是一种聚合酶链反应，其采用变性——退火——延伸三个步骤使DNA基因能够在体外实现解旋解链，类似于一种体外增加、复制形式。PCR技术在1971年由Khorana提出，将DNA进行变形后，与合适的引物进行杂交，并将引物利用DNA聚合酶延伸出来，重复循环该过程使tRNA基因克隆出来。在1985年，PCR技术正式为人们所认可，由此，聚合酶链反应正式实现了细胞内的DNA复制。PCR检测技术在1989年成为重大科学发明，其对于细菌的检测过程中具有重复性好、特异性强、操作简单、稳定性好等优势，逐渐成为检测常见细菌的主要方式，对于人们疾病的预防与防治具有十分重要的作用。
1一般资料与方法
1.1一般资料。本研究采用最为常见的革兰氏阴性杆菌中的埃希菌属、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌属等作为研究方向，采用PCR技术对肠道中的致病菌进行检测，并观察其结果，探讨PCR技术在常见细菌中检测的优势，提高人体预防与防治的效果。
案例资料（食物中毒、突发爆发性腹泻患者中的常见菌群）：
在公共突发事件发生时，肠道致病菌是诱发患者病发腹泻、中毒等的主要原因。肠道致病菌存在的主要原因在于食品污染，而化学性污染、物理性污染以及生物性污染均属于食品污染的形式。
在本研究中案例显示的食物污染形式为生物性污染，当患者感染致病性细菌时，其均出现发烧症状、中毒症状等，这均与食品中细菌的繁殖有关。沙门氏菌属、志贺氏菌菌属、大肠埃希菌属、金黄色葡萄球菌属均属于食品中的肠道致病菌。
本研究采用PCR检测方法对食品中的细菌进行检测，并判断相关检测结果对患者预防、治愈成功率的影响。
1.2方法。
1.2.1公共突发事件中的常见菌群试验标准。选取试验对象：从当地医院急诊科中选择食物中毒、食源性腹泻患者40例。在选取的对象中男性有22例，女性有18例，年龄在32～85岁之间，平均年龄为（59.12±3.21）岁。
对象排除标准：经过局部或全身使用抗生素或激素治疗的患者除外。
试剂与仪器的选择：采用标准菌株、荧光定量PCR试剂盒、iQTN荧光定量PCR仪、ASP-3700紫外光/可见光分光光度计、Biospin细菌基因组DNA提取试剂盒作为试剂与仪器的选择[2]。
1.2.2公共突发事件中的常见菌群试验方法。
1.2.2.1治疗、检查。对入院治疗的患者予以抗生素治疗，提高患者自身免疫力。
对引起食物中毒、爆发腹泻的场所、食物等进行快速检测，一般情况下采用半自动化辅助仪器对病发区食品进行检测，并提高检测的反应速度以及提高处理样品量的能力。本研究中心采用PCR检测技术，实现了一次性扩增，将多种微生物检测出来，实现了检测的多重性。因此在检查过程中发现感染患者的污染食品区有三处，感染传播途径为水和食物。
控制感染源并截断感染途径，从而减少病患人数，防止患者二度感染。
1.2.2.2样本采集。采取现场的可疑食物及患者的呕吐物、粪便，将样本增菌后提取DNA并放入零下20℃的环境中进行保存待用。
1.2.2.3提取标准菌株DNA。采用Biospin细菌基因组DNA提取试剂盒进行标准菌株基因组DNA的提取，并将其放入零下20℃的环境中进行保存[3]。
1.2.2.5制备标准品。观察不同菌株以及菌株特异性引物的PCR检测过程中的反应，对产物进行切胶与回收，提取其DNA片段，并将其作为进行定量的标准品。
采用PCR检测金黄色葡萄球菌、沙门氏菌志贺氏菌等以及细菌通用引物，并观察其反应，将制成的标准本作为检测细菌总量的标准品。其中金黄色葡萄球菌曾引发日本血印奶粉金黄色葡萄球菌肠毒素事件，因此在制作标准品时应该予以重视。
1.2.2.6制作标准曲线。ASP-3700紫外光/可见光分光光度计对制成的标准品DNA的浓度进行测定，并计算标准品的复制数，采用无菌双蒸水对标准品的回收产物进行成倍配比稀释，饭后观察测定的PCR反应，建立Ct值，制作与其浓度值相对应的标准曲线。
1.2.2.7观察待测样本的PCR反应。对待测样本的DBA分别与各种细菌种属的特异性引物实施PCR扩增，并进行测序。
1.2.2.8采用PCR检测金黄色葡萄球菌阳性样本的耐药性。观测待测样本PCR的常规反应，确定金黄色葡萄球菌的耐药属性[4]。
1.3统计学分析。首先进行数据分析，选用的软件为SPSS17.0。其次采用假设检验方法即卡方检验进行计数资料的对比应用。再次应用Student t检测方法进行计量资料的对比应用。最后检测P值，如果P值<0.05，那么数据之间存在差异性，说明其具有统计学意义。
2结果
2.1案例治疗结果。经本研究试验中患者无二度感染现象。 2.2标准曲线。进行标准曲线的制定，其中横坐标为标准品复制数的浓度对数，纵坐标为Ct值，通过平面坐标获得通用引物以及各细菌的种属。从试验结构来看，模板的浓度与Ct值具有相关性，系数维持在0.91～1.04之间。
2.3常规PCR反应。通过观察试验结果，发现所有的通用引物以及样本中PCR反应均显示样本中存在细菌。
3讨论
从实验结果可以看出，存在于肠道中的致病细菌多为沙门氏菌属、大肠埃希菌属与金黄色葡萄球菌等，这些致病因素影响着患者病情痊愈的程度[5]，对患者病情控制具有一定的影响。因此，要对病菌感染源以及传播途径进行控制，并争取治疗的时间，应需要首先采用PCR检测的方法，选择能够覆盖最多细菌种属的通用引物，并作出预后分析[6]。
在其他常见病菌的检测中，也可以应用PCR检测技术，其检测标准与步骤与案例中检验方法类似，通过PCR检测可以有效发现患者病症中的常见细菌，并予以消除，就有高灵敏性、高精确性等临床实践优势[7]。
目前，PCR技术在细菌、病毒、寄生虫检测中取得了良好的研究成果，并将其技术研究应用到其他领域中，以求更大的发展。
参考文献
[1]李昌崇，林立.儿童下呼吸道感染常见细菌病原分布及耐药现状[J].临床儿科杂志，2010，28（2）：106-111
[2]邓冠华，郑璇，胡一敏等.应用基因芯片快速检测临床常见细菌[J].中华检验医学杂志，2011，34（11）：1012-1016
[3]李晓婕，黄绍华.临床常见细菌和ICU院内感染病原菌分布及耐药性的对比分析[J].重庆医学，2011，40（1）：59-61
[4]朱飞舟，陈利玉，刘新发等.10种常见细菌基因检测膜条的研制[J].微生物学杂志，2011，31（4）：58-63
[5]黄卫春，张蓓，徐中等.3812株临床常见细菌耐药性分析[J].检验医学，2010，25（5）：387-390
[6]张文兰，胡同平，王树平等.包头临床常见细菌的耐药性监测[J].中国抗生素杂志，2009，34（4）：204
[7]卓超，黄文祥，郑行萍等.2004～2005年我院临床常见细菌耐药性监测[J].中国抗生素杂志，2007，32（5）：308-312