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[摘要] 目的 观察大鼠灌胃给予四逆汤后，其含药血清对离体蛙心心肌收缩力的作用。 方法 大鼠每日2次灌胃给予四逆汤（1 mL/次），给药1 d 后，分别在末次给药30、60、90、120 min 取血，分离血清。将含药血清加入离体蛙心的灌流液中，观察四逆汤对离体蛙心心肌收缩力的影响。 结果 灌胃给予四逆汤后，含药血清均能显著增强离体蛙心的心肌收缩力。其中末次给药后90 min 采血分离的血清对离体蛙心的作用最强。 结论 四逆汤能增强离体蛙心的心肌收缩力。
[关键词] 四逆汤；血清药理学；离体蛙心
[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2012）05-40-02
Effect of Sini decoction on the frogs' hearts by serum pharmacology
NI Jianxin1 LIN Yuehong1 CHEN Miaozhu2
1.Department of Pharmacy,Baoan District People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518101,China; 2.Department of Community Health Service,Baoan District People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518101,China
[Abstract] Objective To observe the effect of Sini decoction on the frogs' hearts in vitro. Methods The experiment was accomplished by serum pharmacology. Dosages (1 mL/once) was administered to rats twice per day on one day. The blood was collected at 30,60,90,120 min after the last administration and the serum was separated. The separated serum was added to the frogs' hearts in vitro. The influence of the separated serum on the myocardial contractility was observed. Results The separated serum from adminstrered rats was observed to rose the amplitude of cardiac contraction markedly. The effect of serum collected on 90 min was strongest. Conclusion Sini decoction has the effect on rosing the amplitude of cardiac contraction markedly.
[Key words] Sini decoction;Serum pharmacology;Heart in vitro
四逆汤是出自我国汉代名医张仲景的《伤寒论》治疗少阴虚寒证的经典名方，由附子（radix aconiti lateralis preparata）、干姜（rhizoma zingiteris）、甘草（radix glycyrrhizae）组成[1]。方简效宏，具温中逐寒，回阳救逆之功。现代药理研究表明[2]：该方具有显著的强心、增加冠脉流量和升压的作用。临床上用于治疗低血压、休克等症，其口服液被列为中医院必备急救用药。本实验采用血清药理学方法研究四逆汤对离体蛙心心肌收缩力的影响，为进一步研究四逆汤对心脏的作用机制进行初步探索。
1 材料与方法
1.1 一般材料
1.1.1 仪器 KMD 型控温电热套（山东甄城新年仪器厂）、RE-52C 型旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪器厂）、BL-410 生物机能实验系统 （四川成都泰盟科技）、JH-2型肌张力传感器（中国北京航天医学工程研究所）、蛙类手术器械、蛙心夹、主动脉插管。
1.1.2 动物 SD大鼠36只，青蛙46只，雌雄各半，由广州中医药大学动物实验室提供。
1.1.3 药品及试剂 附子、干姜、甘草均购于宝安人民医院中药房。任氏液（Ringer’s solution）每1 000毫升中含NaCl 6.6 g、KCl 0.14 g、NaH2PO4 0.007 g、CaCl2 0.12 g、NaHCO3 0.12 g、葡萄糖 2.0 g。
1.2 方法
1.2.1 四逆汤的制备 依据中华人民共和国药典（2010版）中四逆汤的处方组成，称取附子30 g，干姜20 g，炙甘草30 g，加水640 mL回流提取2次，时间分别为2.0 h和1.5 h ，合并提取液减压浓缩至100 mL，4℃冷藏备用。每毫升四逆汤相当于附子0.3 g，干姜0.2 g，炙甘草0.3 g。
1.2.2 含药血清的制备 取体重（200±20）g的SD大鼠24只，随机分成4组，每组6只。灌胃给予四逆汤（1 mL/次）。每日灌胃2次，给药1 d。分别于末次给药后30、60、90、120 min自心脏取血6~8 mL，3 000 r/min离心15 min，分离得含药血清，于-79℃冷冻备用。
1.3 统计学处理
利用SPSS10.0统计软件对数据进行单因素方差分析和t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 四逆汤对离体蛙心心肌收缩力的影响
取体重（25±5）g的青蛙10只，常规制备蛙心，通过张力传感器连接BL-410 生物机能实验系统，记录蛙心的心肌收缩力，按灌流液中四逆汤浓度由低到高依次进行实验，每次间用任氏液平衡。观察心肌收缩力的变化，结果见表1。由表1可知，随着灌流液中四逆汤浓度的增加，离体蛙心的心肌收缩力逐渐增强。
增强（%）=（给药后肌力-给药前肌力）/ 给药前肌力×100%。
2.2 含药血清对离体蛙心心肌收缩力的影响
取体重（200±20）g的 SD大鼠12只，随机分成两组，每组6只。第Ⅰ组为空白血清组，灌胃给予生理盐水（1 mL/次）；第Ⅱ组为含药血清组，灌胃给予四逆汤（1 mL/次）。以上各组每日灌胃2次，给药1 d。末次给药后30 min 自心脏取血6~8 mL，3 000 r/min离心15 min，分离血清，于-79℃冷冻备用。
取体重（50±10）g的青蛙12只，随机分为两组，常规制备蛙心，按上法记录蛙心的心肌收缩力。第Ⅰ组为空白血清组，将30 min取血制备的空白血清加入灌流液中，体积分数为10%。第Ⅱ组为含药血清组，将30 min取血制备的含药血清加入灌流液中，体积分数同上。观察心肌收缩力的变化，结果含药血清与空白血清比较有明显增强心肌收缩力的作用（P＜0.01）。见表2。
2.3 不同时间取血所得含药血清对蛙心心肌收缩力的影响
取体重（50±10）g的青蛙24只，随机分为4组，常规制备蛙心，按上法记录蛙心的心肌收缩力。待心肌收缩稳定后分别加入大鼠末次给药后30、60、90、120 min取血制备的含药血清，含药血清在灌流液中体积分数为10%，观察心肌收缩力的变化，比较给药后间隔不同时间所制备含药血清对心肌收缩力影响的差异，结果末次给药后90 min取血制备的含药血清对心肌收缩增强最为明显。见表3。
3 讨论
据周明眉[3]报道，四逆汤能增强心肌收缩力，有强心作用。本实验将四逆汤直接加入蛙心灌流液中，观察心肌收缩力的变化。实验结果表明，四逆汤能明显增强心肌收缩力，且随着灌流液中四逆汤浓度的增加，离体蛙心的心肌收缩力逐渐增强。实验中对采血时间及灌流液中含药血清浓度进行了考察。发现给药后90 min的含药血清作用最强，估计此时大鼠血液中四逆汤有效浓度最高；此外通过实验证明含药血清对心肌收缩力的作用强度与灌流液中血清浓度呈明显的量效关系，但由于含药血清量不够，未能获得完整的量效曲线。
观察复方中药对器官的影响方法很多，但若用复方中药直接接触器官，其复杂的成分可影响实验的结果。而给动物灌服中药一定时间后，取其血清进行实验的药理学方法就具有一定的优势，近年来越来越多中药药理实验采用此方法[4-5]。采用含药血清进行离体实验，可以保留通常离体实验的优点，同时由于血清的理化性质与细胞所处的内环境相似。因此，在某种程度上可排除中药制剂直接离体实验所具有的难确定因素的干扰，使实验结果的可信度大大提高。
[参考文献]
[1] 哈小博.漫谈四逆汤[J].求医问药，2001，（3）：23．
[2] 陈奇.中药药理学研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1996：414.
[3] 周明眉.中药血清药理学的方法学研究——给药方案的研究[J].中药药理与临床，1999，15（3）：43-44.
[4] 赵万红，曹永孝.中药血清药理学的方法学探讨[J].中药新药与临床药理，2002，13（2）：122-124.
[5] 刘红，艾民仙，阳辉.运用血清药理学方法研究生脉散对豚鼠离体工作心脏的作用[J].时珍国医国药，2007， 18（8）：1815-1816.
（收稿日期：2011-11-22）
[关键词] 四逆汤；血清药理学；离体蛙心
[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2012）05-40-02
Effect of Sini decoction on the frogs' hearts by serum pharmacology
NI Jianxin1 LIN Yuehong1 CHEN Miaozhu2
1.Department of Pharmacy,Baoan District People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518101,China; 2.Department of Community Health Service,Baoan District People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518101,China
[Abstract] Objective To observe the effect of Sini decoction on the frogs' hearts in vitro. Methods The experiment was accomplished by serum pharmacology. Dosages (1 mL/once) was administered to rats twice per day on one day. The blood was collected at 30,60,90,120 min after the last administration and the serum was separated. The separated serum was added to the frogs' hearts in vitro. The influence of the separated serum on the myocardial contractility was observed. Results The separated serum from adminstrered rats was observed to rose the amplitude of cardiac contraction markedly. The effect of serum collected on 90 min was strongest. Conclusion Sini decoction has the effect on rosing the amplitude of cardiac contraction markedly.
[Key words] Sini decoction;Serum pharmacology;Heart in vitro
四逆汤是出自我国汉代名医张仲景的《伤寒论》治疗少阴虚寒证的经典名方，由附子（radix aconiti lateralis preparata）、干姜（rhizoma zingiteris）、甘草（radix glycyrrhizae）组成[1]。方简效宏，具温中逐寒，回阳救逆之功。现代药理研究表明[2]：该方具有显著的强心、增加冠脉流量和升压的作用。临床上用于治疗低血压、休克等症，其口服液被列为中医院必备急救用药。本实验采用血清药理学方法研究四逆汤对离体蛙心心肌收缩力的影响，为进一步研究四逆汤对心脏的作用机制进行初步探索。
1 材料与方法
1.1 一般材料
1.1.1 仪器 KMD 型控温电热套（山东甄城新年仪器厂）、RE-52C 型旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪器厂）、BL-410 生物机能实验系统 （四川成都泰盟科技）、JH-2型肌张力传感器（中国北京航天医学工程研究所）、蛙类手术器械、蛙心夹、主动脉插管。
1.1.2 动物 SD大鼠36只，青蛙46只，雌雄各半，由广州中医药大学动物实验室提供。
1.1.3 药品及试剂 附子、干姜、甘草均购于宝安人民医院中药房。任氏液（Ringer’s solution）每1 000毫升中含NaCl 6.6 g、KCl 0.14 g、NaH2PO4 0.007 g、CaCl2 0.12 g、NaHCO3 0.12 g、葡萄糖 2.0 g。
1.2 方法
1.2.1 四逆汤的制备 依据中华人民共和国药典（2010版）中四逆汤的处方组成，称取附子30 g，干姜20 g，炙甘草30 g，加水640 mL回流提取2次，时间分别为2.0 h和1.5 h ，合并提取液减压浓缩至100 mL，4℃冷藏备用。每毫升四逆汤相当于附子0.3 g，干姜0.2 g，炙甘草0.3 g。
1.2.2 含药血清的制备 取体重（200±20）g的SD大鼠24只，随机分成4组，每组6只。灌胃给予四逆汤（1 mL/次）。每日灌胃2次，给药1 d。分别于末次给药后30、60、90、120 min自心脏取血6~8 mL，3 000 r/min离心15 min，分离得含药血清，于-79℃冷冻备用。
1.3 统计学处理
利用SPSS10.0统计软件对数据进行单因素方差分析和t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 四逆汤对离体蛙心心肌收缩力的影响
取体重（25±5）g的青蛙10只，常规制备蛙心，通过张力传感器连接BL-410 生物机能实验系统，记录蛙心的心肌收缩力，按灌流液中四逆汤浓度由低到高依次进行实验，每次间用任氏液平衡。观察心肌收缩力的变化，结果见表1。由表1可知，随着灌流液中四逆汤浓度的增加，离体蛙心的心肌收缩力逐渐增强。
增强（%）=（给药后肌力-给药前肌力）/ 给药前肌力×100%。
2.2 含药血清对离体蛙心心肌收缩力的影响
取体重（200±20）g的 SD大鼠12只，随机分成两组，每组6只。第Ⅰ组为空白血清组，灌胃给予生理盐水（1 mL/次）；第Ⅱ组为含药血清组，灌胃给予四逆汤（1 mL/次）。以上各组每日灌胃2次，给药1 d。末次给药后30 min 自心脏取血6~8 mL，3 000 r/min离心15 min，分离血清，于-79℃冷冻备用。
取体重（50±10）g的青蛙12只，随机分为两组，常规制备蛙心，按上法记录蛙心的心肌收缩力。第Ⅰ组为空白血清组，将30 min取血制备的空白血清加入灌流液中，体积分数为10%。第Ⅱ组为含药血清组，将30 min取血制备的含药血清加入灌流液中，体积分数同上。观察心肌收缩力的变化，结果含药血清与空白血清比较有明显增强心肌收缩力的作用（P＜0.01）。见表2。
2.3 不同时间取血所得含药血清对蛙心心肌收缩力的影响
取体重（50±10）g的青蛙24只，随机分为4组，常规制备蛙心，按上法记录蛙心的心肌收缩力。待心肌收缩稳定后分别加入大鼠末次给药后30、60、90、120 min取血制备的含药血清，含药血清在灌流液中体积分数为10%，观察心肌收缩力的变化，比较给药后间隔不同时间所制备含药血清对心肌收缩力影响的差异，结果末次给药后90 min取血制备的含药血清对心肌收缩增强最为明显。见表3。
3 讨论
据周明眉[3]报道，四逆汤能增强心肌收缩力，有强心作用。本实验将四逆汤直接加入蛙心灌流液中，观察心肌收缩力的变化。实验结果表明，四逆汤能明显增强心肌收缩力，且随着灌流液中四逆汤浓度的增加，离体蛙心的心肌收缩力逐渐增强。实验中对采血时间及灌流液中含药血清浓度进行了考察。发现给药后90 min的含药血清作用最强，估计此时大鼠血液中四逆汤有效浓度最高；此外通过实验证明含药血清对心肌收缩力的作用强度与灌流液中血清浓度呈明显的量效关系，但由于含药血清量不够，未能获得完整的量效曲线。
观察复方中药对器官的影响方法很多，但若用复方中药直接接触器官，其复杂的成分可影响实验的结果。而给动物灌服中药一定时间后，取其血清进行实验的药理学方法就具有一定的优势，近年来越来越多中药药理实验采用此方法[4-5]。采用含药血清进行离体实验，可以保留通常离体实验的优点，同时由于血清的理化性质与细胞所处的内环境相似。因此，在某种程度上可排除中药制剂直接离体实验所具有的难确定因素的干扰，使实验结果的可信度大大提高。
[参考文献]
[1] 哈小博.漫谈四逆汤[J].求医问药，2001，（3）：23．
[2] 陈奇.中药药理学研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1996：414.
[3] 周明眉.中药血清药理学的方法学研究——给药方案的研究[J].中药药理与临床，1999，15（3）：43-44.
[4] 赵万红，曹永孝.中药血清药理学的方法学探讨[J].中药新药与临床药理，2002，13（2）：122-124.
[5] 刘红，艾民仙，阳辉.运用血清药理学方法研究生脉散对豚鼠离体工作心脏的作用[J].时珍国医国药，2007， 18（8）：1815-1816.
（收稿日期：2011-11-22）