重组B7-1逆转录病毒载体的构建及其对T细胞功能的影响

• 作 者: 黄贵清 李成荣 赵晓东 杨锡强 蒋莉萍
• 机 构: 400014 重庆医科大学附属儿童医院免疫室,400014 重庆医科大学附属儿童医院免疫室,400014 重庆医科大学附属儿童医院免疫室,400014 重庆医科大学附属儿童医院免疫室,400014 重
• 发表日期: 1999年37期
• 关键词: 逆转录病毒载体 白血病细胞 T细胞功能 B7-1 逆转录病毒科 细胞活化 基因对 包装细胞 磷酸钙沉淀法 多聚酶

目的

探索转B7-1基因治疗白血病的可能性。

方法

通过逆转录多聚酶键反应（RT-PCR）获得人B7-1 cDNA，经酶切后克隆至逆转录病毒载体PLXSN，用磷酸钙沉淀法将其导入包装细胞PA 317，获高效表达B7-1的重组病毒，用重组病毒感染人白血病细胞株K 562和HL 60，获得稳定表达B7-1分子的肿瘤细胞，将其与人外周血单个核细胞（PBMC）混合培养，检测³HTdR掺入和细胞因子白细胞介素2（IL-2）和γ-干扰素（INF-γ）的表达。

结果

B7⁺ K 562、B7⁺-1HL60较载体修饰K 562（neo-K 562）、野生型K 562（Wild-K 562）和nco-HL-60、Wild-HL-60组HTdR掺入明显增强，B7⁺ K 562组为3 680cpm、neo-K 562组为645 cpm、Wild-K 562组为866 cpm、B7⁺ HL60组为3 980 cpm、neo-HL 60组为486cpm、Wild-HL-60组为742 cpm。转B7-1基因的白血病细胞能诱导PBMC产生IL-2及IFN-γ。

结论

转B7-1基因的肿瘤细胞能促进T细胞增殖和分化，推测可能进一步诱导细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性，为在临床开展转B7-1基因治疗小儿白血病打下基础。