【摘 要】
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目的在大肠杆菌中表达抗人TNF-α单链抗体(ScFv),并分析它的结合活性和中和活性.方法在获得抗人TNF-α E6ScFv基因的基础上,用热诱导载体pBV220在大肠杆菌中表达E6ScFv蛋白.E
【机 构】
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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室,陕西西安 710032
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目的在大肠杆菌中表达抗人TNF-α单链抗体(ScFv),并分析它的结合活性和中和活性.方法在获得抗人TNF-α E6ScFv基因的基础上,用热诱导载体pBV220在大肠杆菌中表达E6ScFv蛋白.ELISA测定抗体的结合活性,实时BIA技术确定亲和常数,L929细胞毒试验分析其中和活性.结果克隆了抗人TNF-α E6SeFv基因的热诱导载体pBV220在大肠杆菌中,经42℃热诱导,得到了相对分子质量(Mr)约为27 000的重组蛋白质,表达量占菌体总蛋白的18%.对在大肠杆菌中表达的E6ScFv进行了复性和亲和层析纯化,并进一步证实:①E6ScFv具有与hT-NF-α结合的活性,其结合表位与亲本抗E6单克隆抗体(mAb)相同;②E6ScFv与hTNF-α的亲和常数为3.71×104M-1;③E6ScFv具有中和hTNF-α细胞毒作用的活性.结论以上结果有助于ScFv拮抗TNF-α的治疗.
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