【摘 要】
：
目的分离抗人红细胞血型A抗原单抗50A可变区基因,构建并表达其双价小分子抗体(diabody)融合蛋白.方法设计合成抗体重轻链可变区引物,通过加端PCR技术,在50A Va和VL基因两端引
【机 构】
：
南京军区军事医学研究所江苏南京 210002
论文部分内容阅读
目的分离抗人红细胞血型A抗原单抗50A可变区基因,构建并表达其双价小分子抗体(diabody)融合蛋白.方法设计合成抗体重轻链可变区引物,通过加端PCR技术,在50A Va和VL基因两端引入连结短肽和适当的限制性酶切位点,体外构建50A diabody基因并将其克隆入pGEX-4T-2表达载体中,在大肠杆菌中诱导高效表达.用双脱氧核苷酸链末端终止法分析其核苷酸序列.结果序列分析表明,50A diabody基因全长为717bp;其中VH长366bp,编码122个氨基酸;VL长336bp,编码112个氨基酸,两者以五肽连接头相连.重组体表达产物SDS-PAGE电泳显示,其相对分子质量(Mr)为51 000左右,与预期的结果相符;光吸收(A)扫描结果表明,GST-50A diabody融合蛋白占菌体总蛋白的22.5%,产物主要以不溶性的包涵体形式存在.结论成功构建表达了50A双价小分子抗体基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为研制基因工程血型检定抗体奠定了基础.
其他文献
本文研究一类带有Hassell-Varley型和延迟的非选择收获食饵捕食模型.利用微分方程比较定理和构造一个合适的Lyapunov函数,获得系统的持久性和存在唯一全局吸引的正概周期解的
目的探讨重组的人白细胞介素1-受体拮抗剂(rhIL-1ra)减轻新生大鼠窒息后肾损伤的作用及机制.方法Witsar大鼠30只,7～10 d龄,随机均分为窒息组、窒息+rhIL-1ra处理组和对照组.在
目的为了了解生晒参与红参体外细胞免疫功能的调节作用.方法采用3H-TdR掺入法检测两种参对PBMC体外增殖反应和ELISA方法对诱导细胞因子水平的测定.结果生晒参和红参能明显促
目的建立汉滩病毒感染成龄鼠的模型,以进行mAb的保护实验.方法将7～8 wk Balb/c小鼠于感染病毒前1 d及感染后1 d,2 d和4 d,分别经腹腔注射环磷酰胺65 mg/kg体重,总剂量为260 mg
目的探讨选择性扩增人γδ+T细胞的方法及其细胞毒活性.方法用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb)刺激正常人PBMC,并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ+T细胞,通过MTT试验观
目的在大肠杆菌中高效表达人整合素分子β7片段并制备多抗.方法 DNA重组法构建表达质粒,经IPTG诱导在大肠杆菌中获高效表达.表达产物经免疫印迹鉴定后,用8mol/L尿素溶解包涵
从寻求灰色判断矩阵的所有一致性白化阵、灰元的最小灰域的角度出发,去给出灰色判断矩阵的弱一致性和一致性定义,证明了一致性灰阵中所含信息均为一致性信息,并给出了判定矩
目的分析研究本室保存或构建的各类痢疾菌毒株、减毒突变株、菌苗株的毒力及其生物表型的相互关系,探讨与致病有关的成分,为改进现有菌苗和构建新型菌苗提供参考依据.方法采
克族仅有近20 000人,主要聚居于我国东北地区,少数居住于黑龙江省.近几年随着分子生物学的快速发展,对人类健康群体的研究不断深入.国内外有报道关于不同人种、不同区域、不