【摘 要】
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目的根据链球菌蛋白G与人抗体的Fab片段有弱结合位点的特征,探索应用蛋白G亲合纯化原核表达的人源mAb片段的可行性,为人源基因工程抗体的批量制备提供依据.方法扩增抗HBs+菌
【机 构】
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第二军医大学长征医院临床免疫中心上海 200003第一军医大学南方医院生物治疗中心广东广州 510515;
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目的根据链球菌蛋白G与人抗体的Fab片段有弱结合位点的特征,探索应用蛋白G亲合纯化原核表达的人源mAb片段的可行性,为人源基因工程抗体的批量制备提供依据.方法扩增抗HBs+菌株,经IPTG诱导表达后制备表达产物上清,与商品化链球菌蛋白G亲合胶(GammaBind)反应,PBS洗去非特异结合蛋白,梯度酸洗脱结合UV检测观察解离效果,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检验纯化产物的纯度,Dot Blot鉴定亲合纯化后Fab的抗原反应性,并与抗Fab抗体亲合纯化法进行比较.结果在酸洗脱的早期(pH4.5)即有特异蛋白解离,峰值在pH3.54.0之间,纯化后的抗体片段在PAGE中形成单一区带,达到电泳纯;酶标抗Fab抗体免疫印迹结果证明,电泳显示的单一区带确为Fab蛋白区带;抗原特异Dot blot检测表明,该法制备出的Fab保持了抗原结合活性,且在得率和活性方面优于抗-Fab抗体法.结论本实验采用的一步亲合纯化法具有操作简便、纯化快速和高效的特点,是人源性mAb Fab片段纯化的较佳方法.
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