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摘要：目的 比较巫山淫羊藿不同炮制品及辅料羊脂油中的脂肪酸成分组成和相对含量变化。方法 采用索氏提取法提取脂肪酸成分，用KOH-MeOH溶液甲酯化后，用气相色谱-质谱联用技术分析脂肪酸成分的组成，面积归一化法计算成分相对含量。结果 巫山淫羊藿生品、清炒品、油拌品、油炙品和羊脂油中分别检测出16、14、17、19、18种化合物，油炙品与生品比较，含量升高的组分有6个，占油炙品脂肪酸成分总量的53.10%；降低的有4个组分，占总量的34.36%。结论 巫山淫羊藿不同炮制品中脂肪酸成分的组成和相对含量有较大差异，成分变化与加入羊脂油和加热均有关。
关键词：巫山淫羊藿；脂肪酸成分；气相色谱-质谱联用；炮制
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0055-03
1 仪器与试药
TRACE MS气相色谱-质谱联用仪（Finnigan公司），RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。石油醚（60～90 ℃）、正己烷、甲醇、氯化钠、氢氧化钾、无水硫酸钠均为分析纯（北京化工厂）；三氟化硼乙醚溶液（含量以BF3计，不少于30.0%，天津市光复精细化工研究所）。巫山淫羊藿药材由贵州同济堂制药有限公司提供，经北京中医药大学中药生药系陈玉婷教授鉴定为小檗科植物巫山淫羊藿。去除茎和叶柄，摘取叶片，备用。羊脂购于北京清真食品公司，经炼制后得羊脂油备用。
生品：取巫山淫羊藿药材叶片，喷淋清水，闷润，切成1 cm左右的宽丝，自然晾干。油炙品：取羊脂油置热锅内融化，加入巫山淫羊藿丝，用文火加热，翻炒至油被吸尽，有光泽，取出放凉。每100 kg巫山淫羊藿用羊脂油20 kg。清炒品：取巫山淫羊藿丝，投入热锅内，加热温度和时间同油炙品，取出放凉。油拌品：取一定量的羊脂油，置热锅内融化，停止加热，加入巫山淫羊藿丝，翻动至油被吸尽，取出放凉。辅料用量同油炙品。
2 方法
2.1 脂肪酸成分的提取
称取巫山淫羊藿不同炮制品粉末（过三号筛）各5.0 g，加10倍量石油醚（60～90 ℃）冷浸过夜，索氏提取，回流至提取液无色时，收集提取液。用无水硫酸钠脱水，再减压回收石油醚，得到不同炮制品的油状提取物，备用。
2.2 脂肪酸成分的甲酯化
将不同炮制品的脂肪酸成分和已炼制过的羊脂油样品（0.5 g）置于50 mL锥形瓶中，加入15 mL 0.5 mol/L KOH-MeOH溶液，于60 ℃水浴中30 min，冷却后，再加5 mL 30%三氟化硼乙醚溶液，水浴5 min，取出冷却后，加入10 mL正己烷和10 mL氯化钠饱和溶液，振摇，即得。取上层溶液，过0.23 ?m微孔滤膜，备用。
2.3 气相色谱-质谱条件
DB-5石英毛细管色谱柱（0.25 ?m×30 m×0.25 mm）；载气为高纯度氦气，流量1.0 mL/min；进样口温度250 ℃，传输线温度250 ℃；升温程序：初始温度100 ℃，保持5 min，以8 ℃/min 升温至180 ℃，再以28 ℃/min 升温至230 ℃，维持10 min；进样量1 ?L；分流比40∶1；EI离子源，能量70 eV；离子源温度200 ℃；加速电压200 eV；扫描范围35～688 amu。
2.4 样品测定
将甲酯化后的巫山淫羊藿不同炮制品脂肪酸成分及羊脂油样品在上述GC-MS条件下测定。通过NIST标准质谱数据库进行检索，并结合相关资料进行人工解析，确认成分，并根据GC色谱图，采用面积归一化法计算出各化合物的相对百分含量。
3 结果
巫山淫羊藿不同炮制品和羊脂油样品都检测出30个色谱峰，不同样品鉴定出的化合物不同。从生品样品中鉴定出16个化合物，占脂肪酸成分总量的82.51%，其中含量较高的为棕榈酸和油酸，占48.51%；清炒品中鉴定出14个化合物，占脂肪酸成分总量的87.97%；油拌品中鉴定出17个化合物，占脂肪酸成分总量的63.63 %；油炙品中鉴定出19个化合物，占脂肪酸成分总量的96.61%；羊脂油中鉴定出18个化合物，占羊脂油总量的92.56%。见图1、表1。
由表1中数据可见，巫山淫羊藿炮制前后脂肪酸成分组成和相对含量都产生了较大变化。油炙品与生品比较，含量升高的组分有6个，占油炙品脂肪酸成分总量的53.10%；降低的有4个组分，占其总量的34.36%。新检出辛酸甲酯、壬酸甲酯、1，1-二甲氧基辛烷、癸酸甲酯、1，1-二甲氧基壬烷、辛二酸二甲酯、棕榈油酸甲酯、亚油酸甲酯等8个组分，其中7种和油拌品相同，都来自于羊脂油，亚油酸甲酯在羊脂油中有，而清炒品中也有，可能与羊脂油和加热有关。生品中植酮、14-甲基十五烷酸甲酯、植烷、正二十一烷、植物醇、二十烷酸甲酯6个组分在油炙品中未检测到。同时主要成分相对含量也发生变化，月桂酸甲酯（0.88%→1.86%）、油酸甲酯（13.6%→18.39%）、肉豆蔻酸甲酯（4.09%→12.95%）、硬酯酸甲酯（5.58%→13.44%）含量明显升高，棕榈酸甲酯（35.91%→31.68%）、14-甲基-棕榈酸甲酯（1.02%→0.35%）含量略有降低。
清炒品与生品比较，新产生4个化合物，但生品中有6个化合物在清炒品中未检测到；油拌品与生品比较，新产生7个化合物，而这7种化合物都来自于羊脂油；油炙品与清炒品比较，新产生9个化合物，其中有8个化合物来自于羊脂油，清炒品中4个化合物在油炙品中未检出，表明炮制过程中加热和羊脂油共同发挥作用。
4 讨论
巫山淫羊藿生品中含有月桂酸甲酯和壬二酸二甲酯，清炒品种未检测到，油拌品和油炙品却含有。月桂酸甲酯含量：羊脂油（2.98%）>油炙品（1.86%）>油拌品（1.5%）>生品（0.88%），壬二酸二甲酯含量：生品=羊脂油（2.41%）>油炙品（1.98%）>油拌品（0.89%）。可见，生品含有壬二酸二甲酯，清炒品不含，推测是加热破坏了壬二酸二甲酯，而油制品中含有，是由羊脂油带入。为更好分析比较生炙品中脂肪酸成分含量变化，本试验同时对辅料羊脂油的成分也进行了检测。羊脂油中棕榈酸（28.48%）和油酸（14.31%）含量很高，二者均有降血脂、抗动脉粥样硬化、抗血小板聚集以及抗血栓形成作用。而各组分组成及比例与文献[1]报道存在一定的差异，但主要的脂肪酸同样检测出，结果差异可能与羊脂油来源有关。
中医理论认为羊脂油本身具有温肾助阳作用，其主要成分为脂肪酸，但羊脂油发挥温肾助阳作用的机理尚不明确。油炙巫山淫羊藿与生品比较，黄酮类成分会发生结构改变[2]，本研究结果显示脂肪酸成分在炮制前后发生了明显改变，提示与加入的羊脂油密切相关。故结合羊脂油及巫山淫羊藿不同炮制品的温肾助阳相关药理实验，阐明油炙增强温肾助阳作用的机理。
参考文献：
[1] 黄兰岚，李娆娆，钟利群，等.气相色谱-质谱联用法分析羊脂油的脂肪酸成分[J].时珍国医国药，2009，20（10）：2488-2489.
[2] 谢娟平，向纪明，王浩东.不同方法炮制对巫山淫羊藿中主要成分朝藿定C和淫羊藿苷的影响[J].药物分析杂志，2011，31（4）：674-677.
（收稿日期：2011-10-20，编辑：华强）
关键词：巫山淫羊藿；脂肪酸成分；气相色谱-质谱联用；炮制
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0055-03
1 仪器与试药
TRACE MS气相色谱-质谱联用仪（Finnigan公司），RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。石油醚（60～90 ℃）、正己烷、甲醇、氯化钠、氢氧化钾、无水硫酸钠均为分析纯（北京化工厂）；三氟化硼乙醚溶液（含量以BF3计，不少于30.0%，天津市光复精细化工研究所）。巫山淫羊藿药材由贵州同济堂制药有限公司提供，经北京中医药大学中药生药系陈玉婷教授鉴定为小檗科植物巫山淫羊藿。去除茎和叶柄，摘取叶片，备用。羊脂购于北京清真食品公司，经炼制后得羊脂油备用。
生品：取巫山淫羊藿药材叶片，喷淋清水，闷润，切成1 cm左右的宽丝，自然晾干。油炙品：取羊脂油置热锅内融化，加入巫山淫羊藿丝，用文火加热，翻炒至油被吸尽，有光泽，取出放凉。每100 kg巫山淫羊藿用羊脂油20 kg。清炒品：取巫山淫羊藿丝，投入热锅内，加热温度和时间同油炙品，取出放凉。油拌品：取一定量的羊脂油，置热锅内融化，停止加热，加入巫山淫羊藿丝，翻动至油被吸尽，取出放凉。辅料用量同油炙品。
2 方法
2.1 脂肪酸成分的提取
称取巫山淫羊藿不同炮制品粉末（过三号筛）各5.0 g，加10倍量石油醚（60～90 ℃）冷浸过夜，索氏提取，回流至提取液无色时，收集提取液。用无水硫酸钠脱水，再减压回收石油醚，得到不同炮制品的油状提取物，备用。
2.2 脂肪酸成分的甲酯化
将不同炮制品的脂肪酸成分和已炼制过的羊脂油样品（0.5 g）置于50 mL锥形瓶中，加入15 mL 0.5 mol/L KOH-MeOH溶液，于60 ℃水浴中30 min，冷却后，再加5 mL 30%三氟化硼乙醚溶液，水浴5 min，取出冷却后，加入10 mL正己烷和10 mL氯化钠饱和溶液，振摇，即得。取上层溶液，过0.23 ?m微孔滤膜，备用。
2.3 气相色谱-质谱条件
DB-5石英毛细管色谱柱（0.25 ?m×30 m×0.25 mm）；载气为高纯度氦气，流量1.0 mL/min；进样口温度250 ℃，传输线温度250 ℃；升温程序：初始温度100 ℃，保持5 min，以8 ℃/min 升温至180 ℃，再以28 ℃/min 升温至230 ℃，维持10 min；进样量1 ?L；分流比40∶1；EI离子源，能量70 eV；离子源温度200 ℃；加速电压200 eV；扫描范围35～688 amu。
2.4 样品测定
将甲酯化后的巫山淫羊藿不同炮制品脂肪酸成分及羊脂油样品在上述GC-MS条件下测定。通过NIST标准质谱数据库进行检索，并结合相关资料进行人工解析，确认成分，并根据GC色谱图，采用面积归一化法计算出各化合物的相对百分含量。
3 结果
巫山淫羊藿不同炮制品和羊脂油样品都检测出30个色谱峰，不同样品鉴定出的化合物不同。从生品样品中鉴定出16个化合物，占脂肪酸成分总量的82.51%，其中含量较高的为棕榈酸和油酸，占48.51%；清炒品中鉴定出14个化合物，占脂肪酸成分总量的87.97%；油拌品中鉴定出17个化合物，占脂肪酸成分总量的63.63 %；油炙品中鉴定出19个化合物，占脂肪酸成分总量的96.61%；羊脂油中鉴定出18个化合物，占羊脂油总量的92.56%。见图1、表1。
由表1中数据可见，巫山淫羊藿炮制前后脂肪酸成分组成和相对含量都产生了较大变化。油炙品与生品比较，含量升高的组分有6个，占油炙品脂肪酸成分总量的53.10%；降低的有4个组分，占其总量的34.36%。新检出辛酸甲酯、壬酸甲酯、1，1-二甲氧基辛烷、癸酸甲酯、1，1-二甲氧基壬烷、辛二酸二甲酯、棕榈油酸甲酯、亚油酸甲酯等8个组分，其中7种和油拌品相同，都来自于羊脂油，亚油酸甲酯在羊脂油中有，而清炒品中也有，可能与羊脂油和加热有关。生品中植酮、14-甲基十五烷酸甲酯、植烷、正二十一烷、植物醇、二十烷酸甲酯6个组分在油炙品中未检测到。同时主要成分相对含量也发生变化，月桂酸甲酯（0.88%→1.86%）、油酸甲酯（13.6%→18.39%）、肉豆蔻酸甲酯（4.09%→12.95%）、硬酯酸甲酯（5.58%→13.44%）含量明显升高，棕榈酸甲酯（35.91%→31.68%）、14-甲基-棕榈酸甲酯（1.02%→0.35%）含量略有降低。
清炒品与生品比较，新产生4个化合物，但生品中有6个化合物在清炒品中未检测到；油拌品与生品比较，新产生7个化合物，而这7种化合物都来自于羊脂油；油炙品与清炒品比较，新产生9个化合物，其中有8个化合物来自于羊脂油，清炒品中4个化合物在油炙品中未检出，表明炮制过程中加热和羊脂油共同发挥作用。
4 讨论
巫山淫羊藿生品中含有月桂酸甲酯和壬二酸二甲酯，清炒品种未检测到，油拌品和油炙品却含有。月桂酸甲酯含量：羊脂油（2.98%）>油炙品（1.86%）>油拌品（1.5%）>生品（0.88%），壬二酸二甲酯含量：生品=羊脂油（2.41%）>油炙品（1.98%）>油拌品（0.89%）。可见，生品含有壬二酸二甲酯，清炒品不含，推测是加热破坏了壬二酸二甲酯，而油制品中含有，是由羊脂油带入。为更好分析比较生炙品中脂肪酸成分含量变化，本试验同时对辅料羊脂油的成分也进行了检测。羊脂油中棕榈酸（28.48%）和油酸（14.31%）含量很高，二者均有降血脂、抗动脉粥样硬化、抗血小板聚集以及抗血栓形成作用。而各组分组成及比例与文献[1]报道存在一定的差异，但主要的脂肪酸同样检测出，结果差异可能与羊脂油来源有关。
中医理论认为羊脂油本身具有温肾助阳作用，其主要成分为脂肪酸，但羊脂油发挥温肾助阳作用的机理尚不明确。油炙巫山淫羊藿与生品比较，黄酮类成分会发生结构改变[2]，本研究结果显示脂肪酸成分在炮制前后发生了明显改变，提示与加入的羊脂油密切相关。故结合羊脂油及巫山淫羊藿不同炮制品的温肾助阳相关药理实验，阐明油炙增强温肾助阳作用的机理。
参考文献：
[1] 黄兰岚，李娆娆，钟利群，等.气相色谱-质谱联用法分析羊脂油的脂肪酸成分[J].时珍国医国药，2009，20（10）：2488-2489.
[2] 谢娟平，向纪明，王浩东.不同方法炮制对巫山淫羊藿中主要成分朝藿定C和淫羊藿苷的影响[J].药物分析杂志，2011，31（4）：674-677.
（收稿日期：2011-10-20，编辑：华强）