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摘要：目的 分析ELISA方法检测HIV抗体的相关影响因素，寻求提高ELISA方法检测HIV抗体准确性的科学方法。方法 将2012年1月-2013年12月本实验室在初筛检测中发现的初筛阳性标本23份，全部上送到市艾滋病确证实验室进行确证实验，对患者基本情况、使用试剂、标本状况、操作过程等影响检测结果的相关因素进行统计分析。结果 上送到市艾滋病确证实验室的23份初筛阳性标本，经过确证实验证实，有21份标本确证阳性，确证符合率91.30%，其余均为阴性，在采用ELISA方法检测HIV抗体的整个过程中，包括病人的基本情况、标本的采集、标本的保存、试剂的准备、样品的加入、酶标孔的孵育、酶标孔的洗涤、显色、结果判断等因素都会影响到检测结果。结论 要提高ELISA法检测HIV抗体的准确度，必须制定严格的标准操作程序并按照标准操作程序进行操作，每次检测都要加入外部质控品，绘制质量控制图。
关键词：HIV抗体;ELISA法;影响因素分析
酶联免疫吸附试验（ELISA）作为检测HIV抗体最为常用的一种方法，具有特异性强、灵敏度高、操作方便，血清或者血浆样品都可以检测，操作性非常好[1]，不管是批量样品还是单个样品，都可以用该方法进行检测。本文对ELISA方法检测HIV抗体的相关影响因素进行分析，希望能够找到提高检测结果准确性的有效方法。
1 资料与方法
1.1一般资料 本院2012年1月-2013年12月一共检测3148份标本，其中23份标本初筛阳性。
1.2仪器设备 酶标仪ST-360;洗板机ST-36W。
1.3试剂厂家 北京万泰生物药业股份有限公司，有效期内使用。
1.4方法 本实验室发现初筛检测阳性的标本，全部上送到市艾滋病确证实验室进行确证实验，对患者基本情况、试剂厂家、标本采集及保存、操作过程等影响因素进行统计分析。
2 结 果
上送到市艾滋病确证实验室的23份初筛阳性标本，经过确证实验证实，有21份标本确证阳性，其余均为阴性，确证符合率91.30%。
3 讨 论
在采用ELISA方法检测HIV抗体的整个过程中，病人的基本情况、标本的采集、标本的保存、试剂的准备、样品的加入、酶标孔的孵育、酶标孔的洗涤、显色、结果判断等因素都会影响到检测结果。现分别就以上影响因素进行分析讨论：
3.1病人基本情况 病人体内的一些内源性物质是影响ELISA法检测HIV抗体的重要因素，这些物质主要有内风湿因子、自身抗体、相关补体、以及一些交叉反应物质等，这些物质与酶标孔特异性结合，可能出现假阳性结果[2]。所以在检测中出现初筛阳性的时候，需要结合患者的整体情况来综合判断，从而提高检测结果的准确性。
3.2标本的采集、保存 ELISA方法检测HIV抗体一般都是采用血清样品进行检测，所以在分离血清的时候要充分离心，避免红细胞、纤维蛋白等混入检测样品中。标本要尽量避免溶血，因为溶血标本容易出现假阳性结果，但是有研究认为只要样品溶血血红蛋白浓度不大于4.95g/L则不会影响结果[3]。如果在实际检测中遇到溶血标本，可以先检测其溶血血红蛋白，看是否大于4.95g/L，从而确定标本是否适合采用ELISA法进行检测。徐学新等[4]的研究发现不同程度的乳糜血液放置时间越长OD 值下降越多，越容易导致漏检。黄疸病人如果结合胆红素浓度过高也会影响ELISA检测结果，对于高黄疸病人可选择其他检测方法。另外血清样本须避免反复冻融，反复冻融的标本会产生假阴性结果。
3.3试剂影响因素 所使用的试剂必需经国家食品药品监督管理总局注册批准、批批检合格，临床评估良好并且在有效期内使用。现在多数实验室正在使用的第3代双抗原夹心法试剂盒，具有良好的敏感性和特异性[5]，在使用过程中酶标结合物要避免反复冻融，以免酶的活性降低。检测试剂盒一般保存在2-8℃冰箱，使用前需要放置室温30min，不同厂家、不同批号的试剂不能混用。
3.4加样操作的影响 ELISA检测加样时吸头不能接触到包被物，尽量垂直加入酶标孔的底部，防止标本飞溅出或者产生气泡。加不同样品时需要更换吸头，避免样品间的交叉污染。滴加酶标结合物、显色液、终止液的时候，需要摇匀以后再加。如果样品量大，为了快速加入，可以使用排枪。
3.5孵育的影响 孵育是非常重要的一步，是影响结果的决定性因素，必须严格按照说明书要求的孵育时间及温度进行操作，并注意封闭避免边缘效应。在样品量大的时候，酶标板之间不能互相叠加;干热孵育一般会导致受热不均匀，所以尽量采用水浴箱进行孵育;孵育时间也是影响检测结果的主要因素，曹青梅等[6]通过实验证明，孵育时间过短会引起漏检，至少需要孵育30min以上。陈怀霞[7]研究证明，孵育温度过高或者过低，会出现假阴性或者假阳性结果，所以需要严格控制在37℃以保证检测结果的准确性。
3.6洗板 浓缩洗涤液要严格按照试剂说明书要求的稀释倍数进行稀释，洗涤液注入酶标孔不能外溢，以免引起交叉污染。洗涤液浸泡时间及洗板次数需要严格按照说明书要求进行设定，不能随意增加浸泡时间或者洗板次数。洗板结束后需要将酶标板在吸水纸上拍干，每次更换干净的吸水纸。
3.7显色 国产试剂显色液常为底物液和底物缓冲液两种液体，加显色时应先加底物缓冲液液后加底物液液，加完显色液以后注意避光保存。加入终止液以后应该在10min内完成酶标仪读数，放置时间越长，OD值下降程度越大，时间太长，甚至会出现假阴性。
3.8质量控制 在每一次检测中都必须要加入试剂盒内的内部对照，同时也需要做外部质控对照，绘制质量控制图，定期参加上级实验室组织的室间质量考评活动，严把质量关。
综上所述，ELISA法检测HIV抗体必须严格按照试剂说明书和全国艾滋病检测技术规范的相关要求进行操作，从而确保检测结果的准确性。
参考文献：
[1]谭爱华.ELISA 法检测中应注意的问题[J].实用医技杂志，2008，15（19）：2496.
[2]孙爱琴.ELISA 法检测HIV 抗体的影响因素和控制措施[J].河南预防医学杂志，2012，23（4）：270-272.
[3]孙辉，赵佳强，孙刚，等.内源性疑似干扰物对ELISA 法检测结果的影响[J].检验医学与临床，2011，8（5）：543-545.
[4]徐学新，韩海心，余东.乳糜血样对酶联免疫吸附试验检测结果的影响[J].中国医药指南，2008，6（23）：30-31.
[5]陈云钰.ELISA 法检测HIV 抗体需注意的影响因素「J」.中国卫生检验杂志，2011，6（21）：1564.
[6]曹青梅，乔飞飞.探讨标本与固相抗体反应时间对ELISA法检测HBsAg结果的影响[J].吉林医学，2013，34（3）：403-404.
[7]陈怀霞.温度对ELISA 检测法的影响[J].中国社区医师（医学专业），2009，11（21）：138.
关键词：HIV抗体;ELISA法;影响因素分析
酶联免疫吸附试验（ELISA）作为检测HIV抗体最为常用的一种方法，具有特异性强、灵敏度高、操作方便，血清或者血浆样品都可以检测，操作性非常好[1]，不管是批量样品还是单个样品，都可以用该方法进行检测。本文对ELISA方法检测HIV抗体的相关影响因素进行分析，希望能够找到提高检测结果准确性的有效方法。
1 资料与方法
1.1一般资料 本院2012年1月-2013年12月一共检测3148份标本，其中23份标本初筛阳性。
1.2仪器设备 酶标仪ST-360;洗板机ST-36W。
1.3试剂厂家 北京万泰生物药业股份有限公司，有效期内使用。
1.4方法 本实验室发现初筛检测阳性的标本，全部上送到市艾滋病确证实验室进行确证实验，对患者基本情况、试剂厂家、标本采集及保存、操作过程等影响因素进行统计分析。
2 结 果
上送到市艾滋病确证实验室的23份初筛阳性标本，经过确证实验证实，有21份标本确证阳性，其余均为阴性，确证符合率91.30%。
3 讨 论
在采用ELISA方法检测HIV抗体的整个过程中，病人的基本情况、标本的采集、标本的保存、试剂的准备、样品的加入、酶标孔的孵育、酶标孔的洗涤、显色、结果判断等因素都会影响到检测结果。现分别就以上影响因素进行分析讨论：
3.1病人基本情况 病人体内的一些内源性物质是影响ELISA法检测HIV抗体的重要因素，这些物质主要有内风湿因子、自身抗体、相关补体、以及一些交叉反应物质等，这些物质与酶标孔特异性结合，可能出现假阳性结果[2]。所以在检测中出现初筛阳性的时候，需要结合患者的整体情况来综合判断，从而提高检测结果的准确性。
3.2标本的采集、保存 ELISA方法检测HIV抗体一般都是采用血清样品进行检测，所以在分离血清的时候要充分离心，避免红细胞、纤维蛋白等混入检测样品中。标本要尽量避免溶血，因为溶血标本容易出现假阳性结果，但是有研究认为只要样品溶血血红蛋白浓度不大于4.95g/L则不会影响结果[3]。如果在实际检测中遇到溶血标本，可以先检测其溶血血红蛋白，看是否大于4.95g/L，从而确定标本是否适合采用ELISA法进行检测。徐学新等[4]的研究发现不同程度的乳糜血液放置时间越长OD 值下降越多，越容易导致漏检。黄疸病人如果结合胆红素浓度过高也会影响ELISA检测结果，对于高黄疸病人可选择其他检测方法。另外血清样本须避免反复冻融，反复冻融的标本会产生假阴性结果。
3.3试剂影响因素 所使用的试剂必需经国家食品药品监督管理总局注册批准、批批检合格，临床评估良好并且在有效期内使用。现在多数实验室正在使用的第3代双抗原夹心法试剂盒，具有良好的敏感性和特异性[5]，在使用过程中酶标结合物要避免反复冻融，以免酶的活性降低。检测试剂盒一般保存在2-8℃冰箱，使用前需要放置室温30min，不同厂家、不同批号的试剂不能混用。
3.4加样操作的影响 ELISA检测加样时吸头不能接触到包被物，尽量垂直加入酶标孔的底部，防止标本飞溅出或者产生气泡。加不同样品时需要更换吸头，避免样品间的交叉污染。滴加酶标结合物、显色液、终止液的时候，需要摇匀以后再加。如果样品量大，为了快速加入，可以使用排枪。
3.5孵育的影响 孵育是非常重要的一步，是影响结果的决定性因素，必须严格按照说明书要求的孵育时间及温度进行操作，并注意封闭避免边缘效应。在样品量大的时候，酶标板之间不能互相叠加;干热孵育一般会导致受热不均匀，所以尽量采用水浴箱进行孵育;孵育时间也是影响检测结果的主要因素，曹青梅等[6]通过实验证明，孵育时间过短会引起漏检，至少需要孵育30min以上。陈怀霞[7]研究证明，孵育温度过高或者过低，会出现假阴性或者假阳性结果，所以需要严格控制在37℃以保证检测结果的准确性。
3.6洗板 浓缩洗涤液要严格按照试剂说明书要求的稀释倍数进行稀释，洗涤液注入酶标孔不能外溢，以免引起交叉污染。洗涤液浸泡时间及洗板次数需要严格按照说明书要求进行设定，不能随意增加浸泡时间或者洗板次数。洗板结束后需要将酶标板在吸水纸上拍干，每次更换干净的吸水纸。
3.7显色 国产试剂显色液常为底物液和底物缓冲液两种液体，加显色时应先加底物缓冲液液后加底物液液，加完显色液以后注意避光保存。加入终止液以后应该在10min内完成酶标仪读数，放置时间越长，OD值下降程度越大，时间太长，甚至会出现假阴性。
3.8质量控制 在每一次检测中都必须要加入试剂盒内的内部对照，同时也需要做外部质控对照，绘制质量控制图，定期参加上级实验室组织的室间质量考评活动，严把质量关。
综上所述，ELISA法检测HIV抗体必须严格按照试剂说明书和全国艾滋病检测技术规范的相关要求进行操作，从而确保检测结果的准确性。
参考文献：
[1]谭爱华.ELISA 法检测中应注意的问题[J].实用医技杂志，2008，15（19）：2496.
[2]孙爱琴.ELISA 法检测HIV 抗体的影响因素和控制措施[J].河南预防医学杂志，2012，23（4）：270-272.
[3]孙辉，赵佳强，孙刚，等.内源性疑似干扰物对ELISA 法检测结果的影响[J].检验医学与临床，2011，8（5）：543-545.
[4]徐学新，韩海心，余东.乳糜血样对酶联免疫吸附试验检测结果的影响[J].中国医药指南，2008，6（23）：30-31.
[5]陈云钰.ELISA 法检测HIV 抗体需注意的影响因素「J」.中国卫生检验杂志，2011，6（21）：1564.
[6]曹青梅，乔飞飞.探讨标本与固相抗体反应时间对ELISA法检测HBsAg结果的影响[J].吉林医学，2013，34（3）：403-404.
[7]陈怀霞.温度对ELISA 检测法的影响[J].中国社区医师（医学专业），2009，11（21）：138.