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【摘要】目的：探讨微柱凝胶技术在ABO新生儿溶血病中的应用。方法：采用微柱凝胶技术对66例ABO新生儿溶血病的血样进行检测，同时以传统的试管法抗球蛋白试验作比较。结果：两种方法在ABO-HDN的检出率上无统计学差异，但微柱凝胶技术可以检出试管法所不能检出的阴性血样。结论：微柱凝胶技术能快速准确的检出ABO新生儿溶血病，是直观可靠的方法。
【关键词】微柱凝胶技术；ABO新生儿溶血病
Application of Gel Coombs'test technique in testing ABO-HDN
Jiang Jianfeng (The first people's hospital in hefei Anhui 230061, China)
Miao Yanxia (The branch of first People's hospital shushan hefei Anhui 230061,China)
【Abstract】Objective：To approach the application of Gel Coombs'test technique in testing ABO-HDN. Methods：66 newborns with ABO-HDN were tested by Gel Coombs'test technique comparing with traditional TAT(Tube Agglutination Technique)anti human IgG test.Results：In statistic, testing rate of two methods in ABO-HDN was not obviously different,but Gel Coombs'test technique could test the negative blood samples that could not be tested by TAT.Conclusions：Gel Coombs'test technique can test ABO-HDN quickly and exactly, the technique was reliable and directly observed.
【Key words】Gel Coombs'test technique;ABO-HDN(ABO-Hemolytic Disease of Newborn)
新生儿溶血病(hemolytic disease 0f the new born，HDN)是由于母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内引起的同种被动免疫性疾病[1]。其中以ABO新生儿溶血病较为常见。直接抗球蛋白试验、释放试验、游离抗体实验被称为新生儿溶血病诊断的“三项试验”。诊断ABO-HDN的最有力证据是证实患儿红细胞被来自母亲的IgG抗A(B)抗体所致敏[2]。传统的试管法抗人球蛋白实验(Coombs试验)检测血清IgG抗体，结果可靠，但操作步骤繁琐、耗时。我院近年来引进了微柱凝胶技术，并应用于ABO新生儿溶血病的检测中，取得了很
好的效果。现介绍如下：
1材料与方法
1.1仪器：37℃孵育器、专用离心机、新生儿溶血病卡Ⅰ(A、B 、AB、D、 ctrl、 AHG）新生儿溶血病卡Ⅱ(抗人球蛋白卡，6孔)均由长春博迅生物技术有限责任公司提供。
1.2试剂：抗人球蛋白试剂、ABO试剂红细胞、2-巯基乙醇等由上海输血技术公司提供。
1.3检测样本：我院66例ABO-HDN患儿的血液标本。
1.4实验方法
1.4.1 血型鉴定及直接抗人球蛋白试验取新生儿溶血病卡Ⅰ一张，每孔加入0.5%患儿红细胞悬液50ul，立即使用专用离心机离心5分钟，900rpm2分钟，1500rpm3分钟。取出，判定结果。
1.4.2 游离放散试验取新生儿溶血病卡Ⅱ一张，前三孔标明游离Ac、Bc、Oc，后三孔标明放散Ac、Bc、Oc，前三孔加入患儿血清50μl，后三孔加入患儿红细胞热放散液各50μl(患儿热放散液制作方法：取三洗后患儿压积红细胞1ml，加入等量或半量6%牛血清白蛋白混匀，置56℃水浴箱中孵育10min，期间不断摇动，取出后置56℃热套管中，立即2000rpm离心2～3分钟，取上清液即热放散液)，分别加入相应0.5%试剂ABO红细胞50μl，将新生儿溶血病卡Ⅱ置专用37℃孵育器中孵育15min，立即使用专用离心机离心5 分钟，900rpm2分钟，1500rpm3分钟。取出，根据新生儿血型判读结果。
1.4.3 试管法抗球蛋白试验采用传统的试管法对66例患儿标本同时做抗球蛋白试验。
1.4.4 结果判读在ABO-HDN血清学试验中，直抗试验是检查新生儿红细胞是否被IgG抗体致敏，血清游离抗体和放散液抗体测定是检查IgG抗体的存在和类型[3]。直抗、游离抗体、放散液抗体三项试验中，有2～3项阳性时，可以确认为HDN；如有一项阳性，只有放散液抗体阳性可以确认为HDN[4] 。
2结果分析
2.166例ABO-HDN血样微柱凝胶技术和试管法检测阳性结果
两种方法比较，直抗阳性率差异无显著性(x2=0.298，P＞0.05)，游离抗体阳性率差异无显著性(x2=1.111，P＞0.05)，放散试验阳性率差异无显著性(x2=1.550，P＞0.05)。
2.2试管法直抗试验、游离试验及放散试验阳性血样，微柱凝集试验全部检测为阳性。微柱凝集试验同时检出3例试管法直抗试验阴性，5例试管法游离试验阴性，5例试管法放散试验阴性血样。
3讨论
HDN主要原因是母体经免疫产生同种免疫抗体IgG通过胎盘进入胎儿血循环，与胎儿红细胞结合引起免疫反应性溶血[5]。新生儿溶血病的主要症状和体征有水肿、黄疸、贫血和肝脾肿大，高黄疸者可能导致核黄疸。症状轻重一般取决于母亲的抗体强度、亚类、胎儿红细胞抗原发育程度、胎儿代偿性造血的能力以及免疫功能等诸因素[2]。
抗球蛋白试验是检测HDN的经典方法，能较敏感的检出红细胞膜上的不完全抗体和补体。传统的抗球蛋白试管法易产生假阴性，操作步骤多，重复性差，需高水平技师操作[6]。微柱凝胶管内填充有葡聚糖凝胶和抗人球蛋白试剂，其反应原理是建立在抗球蛋白试验基础上的，是红细胞抗原和抗体在凝胶介质中发生凝集反应。从本次试验结果可以看出，虽然两种方法在ABO-HDN的检出率上无统计学差异，但微柱凝胶技术可以检出试管法所不能检出的阴性血样。并且结果清晰明了，稳定可靠，方法简单，无需洗涤，试验时间短，可大大提高ABO-HDN的阳性检出率，有利于ABO-HDN的早期诊断和治疗[7]，是一项值得推广的技术。
参考文献
[1]李勇.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M] .北京：中国科学技术出版社，1999，173-175.
[2]刘达庄.免疫血液学[M].上海：上海科学技术出版社，2002，132-135.
[3]刘毅，刘衍春，刘洪莉等.微柱凝胶技术在新生儿溶血病血清学检查中的运用.临床检验杂志.2005，23(1)：43.
[4]王培华.输血技术学[M].北京：人民卫生出版社，1998，210.
[5]杨于嘉.新生儿溶血病[J].医学临床研究.2002，19(7)：513.
[6]叶有玩，胡劲辉，范世珍等.微柱凝集技术检测新生儿溶血病的临床应用.中国实验诊断学.2004，8(3)：297.
[7]温施秋，张英.微柱凝胶试验在新生儿溶血病检测中的应用.现代医学检验杂志.2003，18(3)：35.
【关键词】微柱凝胶技术；ABO新生儿溶血病
Application of Gel Coombs'test technique in testing ABO-HDN
Jiang Jianfeng (The first people's hospital in hefei Anhui 230061, China)
Miao Yanxia (The branch of first People's hospital shushan hefei Anhui 230061,China)
【Abstract】Objective：To approach the application of Gel Coombs'test technique in testing ABO-HDN. Methods：66 newborns with ABO-HDN were tested by Gel Coombs'test technique comparing with traditional TAT(Tube Agglutination Technique)anti human IgG test.Results：In statistic, testing rate of two methods in ABO-HDN was not obviously different,but Gel Coombs'test technique could test the negative blood samples that could not be tested by TAT.Conclusions：Gel Coombs'test technique can test ABO-HDN quickly and exactly, the technique was reliable and directly observed.
【Key words】Gel Coombs'test technique;ABO-HDN(ABO-Hemolytic Disease of Newborn)
新生儿溶血病(hemolytic disease 0f the new born，HDN)是由于母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内引起的同种被动免疫性疾病[1]。其中以ABO新生儿溶血病较为常见。直接抗球蛋白试验、释放试验、游离抗体实验被称为新生儿溶血病诊断的“三项试验”。诊断ABO-HDN的最有力证据是证实患儿红细胞被来自母亲的IgG抗A(B)抗体所致敏[2]。传统的试管法抗人球蛋白实验(Coombs试验)检测血清IgG抗体，结果可靠，但操作步骤繁琐、耗时。我院近年来引进了微柱凝胶技术，并应用于ABO新生儿溶血病的检测中，取得了很
好的效果。现介绍如下：
1材料与方法
1.1仪器：37℃孵育器、专用离心机、新生儿溶血病卡Ⅰ(A、B 、AB、D、 ctrl、 AHG）新生儿溶血病卡Ⅱ(抗人球蛋白卡，6孔)均由长春博迅生物技术有限责任公司提供。
1.2试剂：抗人球蛋白试剂、ABO试剂红细胞、2-巯基乙醇等由上海输血技术公司提供。
1.3检测样本：我院66例ABO-HDN患儿的血液标本。
1.4实验方法
1.4.1 血型鉴定及直接抗人球蛋白试验取新生儿溶血病卡Ⅰ一张，每孔加入0.5%患儿红细胞悬液50ul，立即使用专用离心机离心5分钟，900rpm2分钟，1500rpm3分钟。取出，判定结果。
1.4.2 游离放散试验取新生儿溶血病卡Ⅱ一张，前三孔标明游离Ac、Bc、Oc，后三孔标明放散Ac、Bc、Oc，前三孔加入患儿血清50μl，后三孔加入患儿红细胞热放散液各50μl(患儿热放散液制作方法：取三洗后患儿压积红细胞1ml，加入等量或半量6%牛血清白蛋白混匀，置56℃水浴箱中孵育10min，期间不断摇动，取出后置56℃热套管中，立即2000rpm离心2～3分钟，取上清液即热放散液)，分别加入相应0.5%试剂ABO红细胞50μl，将新生儿溶血病卡Ⅱ置专用37℃孵育器中孵育15min，立即使用专用离心机离心5 分钟，900rpm2分钟，1500rpm3分钟。取出，根据新生儿血型判读结果。
1.4.3 试管法抗球蛋白试验采用传统的试管法对66例患儿标本同时做抗球蛋白试验。
1.4.4 结果判读在ABO-HDN血清学试验中，直抗试验是检查新生儿红细胞是否被IgG抗体致敏，血清游离抗体和放散液抗体测定是检查IgG抗体的存在和类型[3]。直抗、游离抗体、放散液抗体三项试验中，有2～3项阳性时，可以确认为HDN；如有一项阳性，只有放散液抗体阳性可以确认为HDN[4] 。
2结果分析
2.166例ABO-HDN血样微柱凝胶技术和试管法检测阳性结果
两种方法比较，直抗阳性率差异无显著性(x2=0.298，P＞0.05)，游离抗体阳性率差异无显著性(x2=1.111，P＞0.05)，放散试验阳性率差异无显著性(x2=1.550，P＞0.05)。
2.2试管法直抗试验、游离试验及放散试验阳性血样，微柱凝集试验全部检测为阳性。微柱凝集试验同时检出3例试管法直抗试验阴性，5例试管法游离试验阴性，5例试管法放散试验阴性血样。
3讨论
HDN主要原因是母体经免疫产生同种免疫抗体IgG通过胎盘进入胎儿血循环，与胎儿红细胞结合引起免疫反应性溶血[5]。新生儿溶血病的主要症状和体征有水肿、黄疸、贫血和肝脾肿大，高黄疸者可能导致核黄疸。症状轻重一般取决于母亲的抗体强度、亚类、胎儿红细胞抗原发育程度、胎儿代偿性造血的能力以及免疫功能等诸因素[2]。
抗球蛋白试验是检测HDN的经典方法，能较敏感的检出红细胞膜上的不完全抗体和补体。传统的抗球蛋白试管法易产生假阴性，操作步骤多，重复性差，需高水平技师操作[6]。微柱凝胶管内填充有葡聚糖凝胶和抗人球蛋白试剂，其反应原理是建立在抗球蛋白试验基础上的，是红细胞抗原和抗体在凝胶介质中发生凝集反应。从本次试验结果可以看出，虽然两种方法在ABO-HDN的检出率上无统计学差异，但微柱凝胶技术可以检出试管法所不能检出的阴性血样。并且结果清晰明了，稳定可靠，方法简单，无需洗涤，试验时间短，可大大提高ABO-HDN的阳性检出率，有利于ABO-HDN的早期诊断和治疗[7]，是一项值得推广的技术。
参考文献
[1]李勇.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M] .北京：中国科学技术出版社，1999，173-175.
[2]刘达庄.免疫血液学[M].上海：上海科学技术出版社，2002，132-135.
[3]刘毅，刘衍春，刘洪莉等.微柱凝胶技术在新生儿溶血病血清学检查中的运用.临床检验杂志.2005，23(1)：43.
[4]王培华.输血技术学[M].北京：人民卫生出版社，1998，210.
[5]杨于嘉.新生儿溶血病[J].医学临床研究.2002，19(7)：513.
[6]叶有玩，胡劲辉，范世珍等.微柱凝集技术检测新生儿溶血病的临床应用.中国实验诊断学.2004，8(3)：297.
[7]温施秋，张英.微柱凝胶试验在新生儿溶血病检测中的应用.现代医学检验杂志.2003，18(3)：35.