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摘要：目的 从免疫抑制角度观察益气活血解毒中药联合树突状细胞（DC）疫苗对小鼠宫颈癌移植瘤的影响，为宫颈癌的治疗提供依据。方法 将1×106个（0.2 mL）U14细胞接种于小鼠背部皮下，7 d后建立荷瘤小鼠模型，将造模成功小鼠随机分为4组，每组10只。对照组0.2 mL/只生理盐水腹腔注射；中药组0.2 mL/只中药灌胃，均每日1次，连续14 d；DC疫苗组局部注射DC疫苗5×106/只，每周1次，共注射2次；联合组给予中药及DC疫苗。观察小鼠瘤质量，采用免疫组化方法测定小鼠瘤组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-10（IL-10）及脾脏CD4+、CD8+ T细胞的百分比。结果 干预14 d后，联合组、中药组及DC疫苗组的瘤质量显著低于对照组，各用药组对小鼠移植瘤生长均有抑制作用，以联合组最为明显。干预后，联合组和中药组TGF-β1、IL-10显著低于DC疫苗组及对照组（P<0.05）；联合组和中药组CD4+、CD8+ T细胞所占百分比显著高于DC疫苗组和对照组（P<0.05）。结论 中药增强DC疫苗的抗肿瘤作用与其去除免疫微环境中免疫抑制因子有关。中药与DC疫苗的联合有望成为一种有效的免疫疗法。
关键词：益气活血解毒中药；树突状细胞疫苗；免疫抑制；转化生长因子-β1；白细胞介素-10；小鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.018
中圖分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）03-0046-03
子宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一。目前，手术、放疗及化疗等外源手段是宫颈癌主要的治疗手段，但效果难以令人满意，2010年全球有20万例死于宫颈癌[1]。2010年4月，美国FDA批准了首个以树突状细胞（DC）为主要效应细
胞的针对前列腺癌的sipuleucel-T上市。DC疫苗通过激发机体内特异性T细胞免疫，致特异性细胞毒T淋巴细胞杀伤来清除肿瘤细胞，可打破患者的免疫耐受和免疫抑制状态。但是由于肿瘤微环境中免疫抑制的存在，限制了DC疫苗的临床疗效，故而减轻肿瘤相关的免疫抑制与DC疫苗的联合应用策略有望逾越这一屏障[2-4]。我们采用益气活血解毒中药与DC疫苗联合应用，通过观察治疗前后小鼠瘤组织中免疫抑制因子转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-10（IL-10）变化及脾脏中CD4+、CD8+ T细胞的浸润情况，探讨其对免疫微环境的影响，为益气活血解毒中药联合DC治疗宫颈癌提供依据。
1 材料与方法
1.1 细胞株
小鼠宫颈癌细胞株U14购于中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心，资源编号为3111C0001CCC000238。
1.2 动物
雌性健康C57BL/6小鼠，4～6周龄，体质量20 g左右，河北医科大学实验动物室提供，合格证号1202173，SPF级条件饲养，应用前观察1周。
1.3 药物
益气活血解毒中药由黄芪60 g、莪术12 g、全蝎6 g、白花蛇舌草15 g等组成，药材购自中国中医科学院广安门医院中药房，水煎煮2次，过滤，中药剂量按照预实验确定，以0.2 mL/只（小鼠用药量是成人用药量的10倍）抑瘤效果最好。
1.4 试剂与仪器
兔抗鼠TGF-β1多克隆抗体、兔抗鼠IL-10多克隆抗体及兔抗鼠CD3多克隆抗体均购于武汉博士德生物工程有限公司；兔抗鼠CD4多克隆抗体及兔抗鼠CD8多克隆抗体均购于DAKO公司；SP法免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。Olympus显微镜，Yamato公司；CO2培养箱；BD FACSAriall 流式细胞仪。
1.5 荷瘤小鼠模型建立
小鼠宫颈癌U14细胞于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中培养并传代，取40只C57BL/6小鼠，将1×106个（0.2 mL） U14细胞接种于每只小鼠背部皮下，接种7 d后开始抑瘤实验。
1.6 树突状细胞疫苗制备
颈椎脱位法处死未荷瘤的C57BL/6小鼠，无菌状态下取股骨，用无菌纱布摩擦股骨，尽量去除骨附带血管、肌肉、肌腱等组织，完全暴露出股骨及干骺端，剪除两端干骺端，浸泡在RPMI- 1640培养基中。用1 mL注射器吸取RPMI-1640培养液，从骨干的一端刺入骨髓腔，将骨髓冲洗到一无菌培养皿中，重复4～6遍，至骨变白，收集培养皿中的骨髓细胞悬液至15 mL离心管，1 500 r/min离心5 min。每只小鼠用4个培养皿，每个培养皿用4 mL RPMI-1640培养基，分别加入已稀释好的rmGM-CSF（10 ng/mL）、rmIL-4（5 ng/mL）。将培养皿放入37 ℃、5%CO2培养箱中避光培养48 h。培养第3日每个培养皿再加入4 mL RPMI-1640培养基，并加入rmGM-CSF（10 ng/mL）和rmIL-4（5 ng/mL）。第5日加入肿瘤细胞抗原100 ?g/mL，并加入rmGM-CSF（10 ng/mL）。第6日加入脂多糖（1 000 ng/mL）和rmGM-CSF（10 ng/mL），诱导DC成熟。至第7日DC发育成熟，流式细胞仪鉴定DC表型。
1.7 抑瘤实验
将造模成功小鼠随机分成4组，每组10只。对照组腹腔注射生理盐水（0.2 mL/只）；中药组给予中药灌胃（0.2 mL/只），每日1次，连续14 d；DC疫苗组小鼠肿瘤局部注射DC疫苗5×106/只，每周1次，连续2周；联合组给予中药灌胃（0.2 mL/只）及局部注射DC疫苗（5×106/只）。实验结束后颈椎脱位法处死小鼠，完整剥离肿瘤并称量瘤质量，计算抑瘤率（IR）=（对照组瘤质量-实验组瘤质量）/对照组瘤质量×100%。 1.8 免疫组化检测
将小鼠肿瘤组织和脾脏用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木精伊红（HE）染色，光镜观察。采用免疫组化SP法检测小鼠肿瘤组织中TGF-β1、IL-10的表达情况及脾脏中CD4+、CD8+ T细胞的浸润情况。
1.9 结果判定
所有标本均采用麦克奥迪医学图像分析软件进行定量分析。细胞浆、胞膜和/或胞外被染成棕黄色为阳性反应，显微镜下观察棕黄色染色深浅及染色范围，用平均光密度值（OD值）表示TGF-β1和IL-10表达情况。显微镜下观察CD4+、CD8+ T细胞，每例标本分别在显微镜下进行细胞计数，胞膜及胞浆染色明显者计为阳性，用每个视野下阳性细胞数所占整个视野细胞总数的百分比表示该细胞所占的百分比，计算阳性细胞的百分数，每组计数10个视野。
1.10 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，所有数据用—x±s表示，组间比较采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 鼠骨髓来源的树突状细胞形态观察
采用倒置显微镜观察，第1-3日，骨髓来源细胞多数为贴壁生长，细胞体积小，圆形透亮，散在分布；第4-5日，细胞数量增加，部分细胞体积增大，呈半悬浮生长并聚集成团；第5-7日，细胞数量明显增多，部分細胞可见树突状突起或毛刺状突起，大部分悬浮生长（见图1）。
2.2 流式细胞仪鉴定树突状细胞
取培养7 d的DC标记后通过流式细胞仪检测，CD11c+CD86+DC纯度为89%，表明为典型成熟DC。
2.3 中药联合树突状细胞疫苗对小鼠移植瘤瘤质量及抑瘤率的影响
各用药组瘤质量均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），各用药组对小鼠移植瘤生长均有抑制作用，以联合组最为明显。见表1。
2.4 免疫组化检测结果
细胞内可见棕黄色粗颗粒分布或棕黄色细腻颗粒弥漫分布者为阳性反应，观察棕黄色颗粒染色深浅及染色范围。各组荷瘤小鼠肿瘤组织中TGF-β1、IL-10及脾组织中CD4+、CD8+ T细胞免疫组化表达情况见图2～图5。中药组和联合组TGF-β1、IL-10的表达分别与DC疫苗组、对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；而中药组与联合组、DC疫苗组与对照组比较，差异无统计学意义。采用麦克奥迪数码医学图像分析系统对免疫组织化学结果进行定量分析。中药组和联合组CD4+、CD8+ T细胞所占百分比分别与对照组、DC疫苗组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；而DC疫苗组与对照组、中药组与联合组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表2、表3。
3 讨论
1973年，斯坦曼从小鼠的脾脏中发现了一种新的细胞类型，具有与过去发现的其他免疫细胞迥然不同的形态，他将其命名为树突状细胞。2011年因其“发现树突状细胞并阐明其在获得性免疫中的作用”而获得诺贝尔医学生理奖[5]。树突状细胞广泛存在于外周组织，通过其模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR）捕捉并识别抗原，活化后的DC迁移至附近的淋巴结，在这里将抗原提呈给T淋巴细胞，从而产生抗原特异性的T淋巴细胞，发生相应的免疫应答。不同成熟状态的DC具有不同的功能，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T细胞，处于启动、调控并维持免疫应答的中心环节。目前来越来越多的研究表明，由DC激活的细胞免疫在抗肿瘤过程中起着主导作用[6-8]，显示出了DC肿瘤疫苗在肿瘤的预防和治疗的巨大前景。但是由于肿瘤内免疫抑制微环境的存在，导致以DC疫苗为代表的肿瘤生物治疗的效果往往不够理想。在肿瘤微环境中，调节性T细胞（TRegs）以及肿瘤细胞或基质细胞可以分泌多种免疫抑制性细胞因子（如TGF-β1、IL-10等），抑制机体的抗肿瘤免疫[9]。
本实验采用益气活血解毒中药联合DC疫苗作用于荷宫颈癌U14细胞的小鼠，观察肿瘤微环境中免疫抑制因子TGF-β1、IL-10及小鼠脾脏CD4、CD8的表达，结果显示联合组小鼠生长状态较好，TGF-β1和IL-10表达均低于对照组和DC疫苗组，说明中药可下调肿瘤组织中的免疫抑制性细胞因子TGF-β1和IL-10的表达；联合组小鼠脾脏中CD4+、CD8+ T细胞比例高于对照组和DC疫苗组。
中医认为宫颈癌的发生多由脾湿、肝郁、肾虚、脏腑功能亏损以致冲任失调、督脉失约而成，不外正虚邪实两方面。尤其经过手术、放化疗后，患者多表现正气亏虚、瘀血阻滞、余毒未净之证[10]。益气活血解毒中药方中，黄芪性温，味微甘，归脾、肺经，其补气之功最优；莪术可消瘀血，与黄芪配伍，则瘀血去而气血不致损伤，且芪能补气，得莪术以流通之，则补而不滞，而元气既旺，愈能激发莪术之力以消癥瘕[11]。
白花蛇舌草味微苦、甘，性寒，入胃、大肠、小肠经，具有清热解毒及消痈活血作用[12]。全蝎辛平有毒，归肝经，具有熄风解痉、解毒散结、通络止痛之功，选用搜剔之虫类药有针对“久病入络”之意[13]。
本研究结果为益气活血解毒中药联合DC疫苗的治疗策略提供了一定的实验依据。但因CD4及CD8亚型复杂，在免疫微环境中发挥免疫抑制作用的亚型调节T细胞及免疫增强作用效应T细胞与TGF-β1、IL-10的变化关系需进一步验证。
参考文献：
[1] NCCN Guidelines Version 1.2012 Cervical Cancer[S]. https：// subscriptions.nccn.org/login.aspx？returnurl=ContinueToEvent.aspx.
[2] 汪治宇，王聪敏，李幸.树突状细胞的肿瘤个体化治疗[J].药品评价， 2012，9（18）：20-25. [3] Novitskiy SV， Ryzhov S， Zaynagetdinov R， et al. Adenosine receptors in regulation of dendritic cell differentiation and function[J]. Blood，2008，112（5）：1822-1831.
[4] Vander Most RG， Currie AJ， Robinson BW， et al. Decoding coding dangerous death： How cytotoxic chemotherapy invokes inflammation， immunity or nothing at all[J]. Cell Death Differ，2008，15：13-20
[5] Friedrich MJ. Nobel prize honors immunity researchers[J]. JAMA， 2011，306（18）：1966-1967.
[6] Hovden AO， Appel S. The first dendritic cell-based therapeutic cancer vaccine is approved by the FDA[J]. Scand J Immunol，2010， 72（6）：554.
[7] Steinman RM， Banchereau J. Taking dendritic cells into medicine[J]. Nature，2007，449（7161）：419-426.
[8] Avigan D， Rosenblatt J， Kufe D. Dendritic/Tumor fusion cells as cancer vaccines[J]. Semin Oncol，2012，39（3）：287-295.
[9] Zloza A， Jagoda MC， Lyons GE， et al. CD8 co-receptor promotes susceptibility of CD8+ T cells to transforming growth factor-β- mediated suppression[J]. Cancer Immunol Immunother，2011，60（2）：291-297.
[10] 林洪生.中国百年百名名中医——余桂清[M].北京：中国中医药出版社，2003：214-227.
[11] 张锡纯.医学衷中参西录（上）[M].北京：人民卫生出版社，2006：45-47.
[12] 陳良良，梁华.中医药免疫调节治疗恶性肿瘤研究进展[J].中国中医药信息杂志，2004，11（9）：839-841.
[13] 邱志济，朱建平，马璇卿.朱良春杂病廉验特色发挥[M].北京：中医古籍出版社，2004：85-87.
（收稿日期：2013-01-04，编辑：华强）
关键词：益气活血解毒中药；树突状细胞疫苗；免疫抑制；转化生长因子-β1；白细胞介素-10；小鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.018
中圖分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）03-0046-03
子宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一。目前，手术、放疗及化疗等外源手段是宫颈癌主要的治疗手段，但效果难以令人满意，2010年全球有20万例死于宫颈癌[1]。2010年4月，美国FDA批准了首个以树突状细胞（DC）为主要效应细
胞的针对前列腺癌的sipuleucel-T上市。DC疫苗通过激发机体内特异性T细胞免疫，致特异性细胞毒T淋巴细胞杀伤来清除肿瘤细胞，可打破患者的免疫耐受和免疫抑制状态。但是由于肿瘤微环境中免疫抑制的存在，限制了DC疫苗的临床疗效，故而减轻肿瘤相关的免疫抑制与DC疫苗的联合应用策略有望逾越这一屏障[2-4]。我们采用益气活血解毒中药与DC疫苗联合应用，通过观察治疗前后小鼠瘤组织中免疫抑制因子转化生长因子-β1（TGF-β1）、白细胞介素-10（IL-10）变化及脾脏中CD4+、CD8+ T细胞的浸润情况，探讨其对免疫微环境的影响，为益气活血解毒中药联合DC治疗宫颈癌提供依据。
1 材料与方法
1.1 细胞株
小鼠宫颈癌细胞株U14购于中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心，资源编号为3111C0001CCC000238。
1.2 动物
雌性健康C57BL/6小鼠，4～6周龄，体质量20 g左右，河北医科大学实验动物室提供，合格证号1202173，SPF级条件饲养，应用前观察1周。
1.3 药物
益气活血解毒中药由黄芪60 g、莪术12 g、全蝎6 g、白花蛇舌草15 g等组成，药材购自中国中医科学院广安门医院中药房，水煎煮2次，过滤，中药剂量按照预实验确定，以0.2 mL/只（小鼠用药量是成人用药量的10倍）抑瘤效果最好。
1.4 试剂与仪器
兔抗鼠TGF-β1多克隆抗体、兔抗鼠IL-10多克隆抗体及兔抗鼠CD3多克隆抗体均购于武汉博士德生物工程有限公司；兔抗鼠CD4多克隆抗体及兔抗鼠CD8多克隆抗体均购于DAKO公司；SP法免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。Olympus显微镜，Yamato公司；CO2培养箱；BD FACSAriall 流式细胞仪。
1.5 荷瘤小鼠模型建立
小鼠宫颈癌U14细胞于含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中培养并传代，取40只C57BL/6小鼠，将1×106个（0.2 mL） U14细胞接种于每只小鼠背部皮下，接种7 d后开始抑瘤实验。
1.6 树突状细胞疫苗制备
颈椎脱位法处死未荷瘤的C57BL/6小鼠，无菌状态下取股骨，用无菌纱布摩擦股骨，尽量去除骨附带血管、肌肉、肌腱等组织，完全暴露出股骨及干骺端，剪除两端干骺端，浸泡在RPMI- 1640培养基中。用1 mL注射器吸取RPMI-1640培养液，从骨干的一端刺入骨髓腔，将骨髓冲洗到一无菌培养皿中，重复4～6遍，至骨变白，收集培养皿中的骨髓细胞悬液至15 mL离心管，1 500 r/min离心5 min。每只小鼠用4个培养皿，每个培养皿用4 mL RPMI-1640培养基，分别加入已稀释好的rmGM-CSF（10 ng/mL）、rmIL-4（5 ng/mL）。将培养皿放入37 ℃、5%CO2培养箱中避光培养48 h。培养第3日每个培养皿再加入4 mL RPMI-1640培养基，并加入rmGM-CSF（10 ng/mL）和rmIL-4（5 ng/mL）。第5日加入肿瘤细胞抗原100 ?g/mL，并加入rmGM-CSF（10 ng/mL）。第6日加入脂多糖（1 000 ng/mL）和rmGM-CSF（10 ng/mL），诱导DC成熟。至第7日DC发育成熟，流式细胞仪鉴定DC表型。
1.7 抑瘤实验
将造模成功小鼠随机分成4组，每组10只。对照组腹腔注射生理盐水（0.2 mL/只）；中药组给予中药灌胃（0.2 mL/只），每日1次，连续14 d；DC疫苗组小鼠肿瘤局部注射DC疫苗5×106/只，每周1次，连续2周；联合组给予中药灌胃（0.2 mL/只）及局部注射DC疫苗（5×106/只）。实验结束后颈椎脱位法处死小鼠，完整剥离肿瘤并称量瘤质量，计算抑瘤率（IR）=（对照组瘤质量-实验组瘤质量）/对照组瘤质量×100%。 1.8 免疫组化检测
将小鼠肿瘤组织和脾脏用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木精伊红（HE）染色，光镜观察。采用免疫组化SP法检测小鼠肿瘤组织中TGF-β1、IL-10的表达情况及脾脏中CD4+、CD8+ T细胞的浸润情况。
1.9 结果判定
所有标本均采用麦克奥迪医学图像分析软件进行定量分析。细胞浆、胞膜和/或胞外被染成棕黄色为阳性反应，显微镜下观察棕黄色染色深浅及染色范围，用平均光密度值（OD值）表示TGF-β1和IL-10表达情况。显微镜下观察CD4+、CD8+ T细胞，每例标本分别在显微镜下进行细胞计数，胞膜及胞浆染色明显者计为阳性，用每个视野下阳性细胞数所占整个视野细胞总数的百分比表示该细胞所占的百分比，计算阳性细胞的百分数，每组计数10个视野。
1.10 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，所有数据用—x±s表示，组间比较采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 鼠骨髓来源的树突状细胞形态观察
采用倒置显微镜观察，第1-3日，骨髓来源细胞多数为贴壁生长，细胞体积小，圆形透亮，散在分布；第4-5日，细胞数量增加，部分细胞体积增大，呈半悬浮生长并聚集成团；第5-7日，细胞数量明显增多，部分細胞可见树突状突起或毛刺状突起，大部分悬浮生长（见图1）。
2.2 流式细胞仪鉴定树突状细胞
取培养7 d的DC标记后通过流式细胞仪检测，CD11c+CD86+DC纯度为89%，表明为典型成熟DC。
2.3 中药联合树突状细胞疫苗对小鼠移植瘤瘤质量及抑瘤率的影响
各用药组瘤质量均低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），各用药组对小鼠移植瘤生长均有抑制作用，以联合组最为明显。见表1。
2.4 免疫组化检测结果
细胞内可见棕黄色粗颗粒分布或棕黄色细腻颗粒弥漫分布者为阳性反应，观察棕黄色颗粒染色深浅及染色范围。各组荷瘤小鼠肿瘤组织中TGF-β1、IL-10及脾组织中CD4+、CD8+ T细胞免疫组化表达情况见图2～图5。中药组和联合组TGF-β1、IL-10的表达分别与DC疫苗组、对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；而中药组与联合组、DC疫苗组与对照组比较，差异无统计学意义。采用麦克奥迪数码医学图像分析系统对免疫组织化学结果进行定量分析。中药组和联合组CD4+、CD8+ T细胞所占百分比分别与对照组、DC疫苗组比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；而DC疫苗组与对照组、中药组与联合组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表2、表3。
3 讨论
1973年，斯坦曼从小鼠的脾脏中发现了一种新的细胞类型，具有与过去发现的其他免疫细胞迥然不同的形态，他将其命名为树突状细胞。2011年因其“发现树突状细胞并阐明其在获得性免疫中的作用”而获得诺贝尔医学生理奖[5]。树突状细胞广泛存在于外周组织，通过其模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR）捕捉并识别抗原，活化后的DC迁移至附近的淋巴结，在这里将抗原提呈给T淋巴细胞，从而产生抗原特异性的T淋巴细胞，发生相应的免疫应答。不同成熟状态的DC具有不同的功能，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T细胞，处于启动、调控并维持免疫应答的中心环节。目前来越来越多的研究表明，由DC激活的细胞免疫在抗肿瘤过程中起着主导作用[6-8]，显示出了DC肿瘤疫苗在肿瘤的预防和治疗的巨大前景。但是由于肿瘤内免疫抑制微环境的存在，导致以DC疫苗为代表的肿瘤生物治疗的效果往往不够理想。在肿瘤微环境中，调节性T细胞（TRegs）以及肿瘤细胞或基质细胞可以分泌多种免疫抑制性细胞因子（如TGF-β1、IL-10等），抑制机体的抗肿瘤免疫[9]。
本实验采用益气活血解毒中药联合DC疫苗作用于荷宫颈癌U14细胞的小鼠，观察肿瘤微环境中免疫抑制因子TGF-β1、IL-10及小鼠脾脏CD4、CD8的表达，结果显示联合组小鼠生长状态较好，TGF-β1和IL-10表达均低于对照组和DC疫苗组，说明中药可下调肿瘤组织中的免疫抑制性细胞因子TGF-β1和IL-10的表达；联合组小鼠脾脏中CD4+、CD8+ T细胞比例高于对照组和DC疫苗组。
中医认为宫颈癌的发生多由脾湿、肝郁、肾虚、脏腑功能亏损以致冲任失调、督脉失约而成，不外正虚邪实两方面。尤其经过手术、放化疗后，患者多表现正气亏虚、瘀血阻滞、余毒未净之证[10]。益气活血解毒中药方中，黄芪性温，味微甘，归脾、肺经，其补气之功最优；莪术可消瘀血，与黄芪配伍，则瘀血去而气血不致损伤，且芪能补气，得莪术以流通之，则补而不滞，而元气既旺，愈能激发莪术之力以消癥瘕[11]。
白花蛇舌草味微苦、甘，性寒，入胃、大肠、小肠经，具有清热解毒及消痈活血作用[12]。全蝎辛平有毒，归肝经，具有熄风解痉、解毒散结、通络止痛之功，选用搜剔之虫类药有针对“久病入络”之意[13]。
本研究结果为益气活血解毒中药联合DC疫苗的治疗策略提供了一定的实验依据。但因CD4及CD8亚型复杂，在免疫微环境中发挥免疫抑制作用的亚型调节T细胞及免疫增强作用效应T细胞与TGF-β1、IL-10的变化关系需进一步验证。
参考文献：
[1] NCCN Guidelines Version 1.2012 Cervical Cancer[S]. https：// subscriptions.nccn.org/login.aspx？returnurl=ContinueToEvent.aspx.
[2] 汪治宇，王聪敏，李幸.树突状细胞的肿瘤个体化治疗[J].药品评价， 2012，9（18）：20-25. [3] Novitskiy SV， Ryzhov S， Zaynagetdinov R， et al. Adenosine receptors in regulation of dendritic cell differentiation and function[J]. Blood，2008，112（5）：1822-1831.
[4] Vander Most RG， Currie AJ， Robinson BW， et al. Decoding coding dangerous death： How cytotoxic chemotherapy invokes inflammation， immunity or nothing at all[J]. Cell Death Differ，2008，15：13-20
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[9] Zloza A， Jagoda MC， Lyons GE， et al. CD8 co-receptor promotes susceptibility of CD8+ T cells to transforming growth factor-β- mediated suppression[J]. Cancer Immunol Immunother，2011，60（2）：291-297.
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[13] 邱志济，朱建平，马璇卿.朱良春杂病廉验特色发挥[M].北京：中医古籍出版社，2004：85-87.
（收稿日期：2013-01-04，编辑：华强）