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摘要：物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
关键词：紫外可见分光光度计工作原理操作方法
【中图分类号】R9【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2013）03-0291-02
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
1工作原理浅析
紫外分光光度计对于大多数人来说还是相当陌生的，我们在先了解其工作原理的基础上再来知晓其主要用途。紫外分光光度计基本工作原理：紫外分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外-可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析紫外分光光度计特点和主要用途：紫外-可见光谱仪涉及的波长范围是0.2-0.8微米，它在有机化学研究中得到广泛的应用。通常用作物质鉴定、纯度检查，有机分子结构的研究。在定量方面，可测定结构比较复杂的化合物和混合物中各组分的含量，也可以测定物质的离解常数，络合物的稳定常数，物质分子量鉴别和微量滴定中指示终点以及在高效液相色谱中作检测器等。
2仪器操作方法
打开计算机的电源开关，进入Windows操作环境。确认样品室中无挡光物，打开紫外分光光度计电源，单击“开始”选择“程序”→UVWin5紫外软件V5.0.4，进入紫外控制程序，出现紫外初始化画面，计算机对紫外进行自检并初始化，仪器需要预热15-20min。在样品池插入黑挡板，选择“测量”菜单中的“暗电流校正”项，在整个波长范围内进行暗电流校正并存储数据。选择“应用”菜单中的测量模式（光谱测量、光度测量、定量测量和时间扫描四种模式），选择“配置”菜单中的“参数”项，设置测量参数。在样品池和参比池中放入参比溶液，选择“测量”菜单中的“基线校正”项，在整个波长范围内进行基线校正，并存储数据。根据参比池在内，样品池在外的原则放入样品，点击“Read”（或Start）进行测量。保存测量数据。测量结束后，关闭测量窗口，关闭紫外分光光度计主机电源，推出Windows，关闭电脑。取出比色皿，冲洗（注意：可见光测定时用玻璃比色皿，紫外光测定时用石英比色皿）。
3注意事项
3.1方法：在分析中必须对分光光度计设定一些必要的参数，这些参数的组合就形成一个“方法”。进入所需方法，在方法窗口中选择所需方法的文件名。扫描、波长编程及时间驱动，各项方法可根据显示的参数表，逐项按需要选用或填入，并可参考提示；浓度方法窗口下方标签较多，说明做浓度测定时需要参数较多。用鼠标指按每一标签，可翻出下页，其上有一些需要测定的参数。必须逐页设定。当所需的各项参数都已在参数中设好后，必须用鼠标指按SETUP，才能将仪器调整到所设状态。
3.2扫描：时间驱动，波长编程方法选好后，先放入参比溶液，按AUTOZERO键，进行自动校零或背景校正结束后再放入样品，按START，分光光度计即开始进行，同时屏幕上出现图形窗口，将结果显示出来。浓度：制订标准曲线方法选好后，确认各项数据正确，特别是REFS页中第一行要选中右上角的“edit mode”。再放入参比溶液，按AUTOZERO键自动校零或背景校正。按setup，待该图标消失后，再按“start”，按提示依次放入标准色列的各管溶液，每次都按提示进行操作。标准色列测定，完毕后，屏幕上出现calibgraphwindow，显示拟合的标准线，并标出各项标准管的位置，屏幕下方还有一条Concentration mode的对话框，可以用来修改拟合的曲线类型（按change calbration），或修改标准溶液的任何一管（replace），或取消某一管（delete），或增加标准溶液管数（add）。如过已经满意，则按analyse sample键，进入样品测定窗口。标准曲线有关的各项数据，均在calibresultwindow中，可用鼠标将其调出观察。其中包括每个标准溶液的具体数据，标准曲线的回程方程式，相关系数，残差。
3.3测定：样品浓度测定，刚制定好的标准曲线接着进行样品浓度测定时，只需在concentration mode对话框按analyse sample键，进入样品测定窗口。按设定的样品顺序放入各样品管，每次按提示进行操作。屏幕上出现结果窗口，结果数据将依次显示在样品表中的相应位置。利用原有的标准曲线接着进行样品浓度测定时。调出所测定样品的浓度方法文件，首先调出refs页，将原设edit mode选项取消，改设左上角的using exiting calibration。重新将方法存盘，则今后再调用时即不需再作修改。在sample页中按要求重设各种样品名称机样品信息。按工具条中setup键，将主机设到该方法所设定的条件。将参比溶液放入比色室，按autozero键做背景校零。按start键，按设定的样品顺序放入各样品管，每次按提示进行操作。屏幕上出现结果窗口，结果数据将依次显示在样品表中相应位置。
关键词：紫外可见分光光度计工作原理操作方法
【中图分类号】R9【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2013）03-0291-02
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
1工作原理浅析
紫外分光光度计对于大多数人来说还是相当陌生的，我们在先了解其工作原理的基础上再来知晓其主要用途。紫外分光光度计基本工作原理：紫外分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外-可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析紫外分光光度计特点和主要用途：紫外-可见光谱仪涉及的波长范围是0.2-0.8微米，它在有机化学研究中得到广泛的应用。通常用作物质鉴定、纯度检查，有机分子结构的研究。在定量方面，可测定结构比较复杂的化合物和混合物中各组分的含量，也可以测定物质的离解常数，络合物的稳定常数，物质分子量鉴别和微量滴定中指示终点以及在高效液相色谱中作检测器等。
2仪器操作方法
打开计算机的电源开关，进入Windows操作环境。确认样品室中无挡光物，打开紫外分光光度计电源，单击“开始”选择“程序”→UVWin5紫外软件V5.0.4，进入紫外控制程序，出现紫外初始化画面，计算机对紫外进行自检并初始化，仪器需要预热15-20min。在样品池插入黑挡板，选择“测量”菜单中的“暗电流校正”项，在整个波长范围内进行暗电流校正并存储数据。选择“应用”菜单中的测量模式（光谱测量、光度测量、定量测量和时间扫描四种模式），选择“配置”菜单中的“参数”项，设置测量参数。在样品池和参比池中放入参比溶液，选择“测量”菜单中的“基线校正”项，在整个波长范围内进行基线校正，并存储数据。根据参比池在内，样品池在外的原则放入样品，点击“Read”（或Start）进行测量。保存测量数据。测量结束后，关闭测量窗口，关闭紫外分光光度计主机电源，推出Windows，关闭电脑。取出比色皿，冲洗（注意：可见光测定时用玻璃比色皿，紫外光测定时用石英比色皿）。
3注意事项
3.1方法：在分析中必须对分光光度计设定一些必要的参数，这些参数的组合就形成一个“方法”。进入所需方法，在方法窗口中选择所需方法的文件名。扫描、波长编程及时间驱动，各项方法可根据显示的参数表，逐项按需要选用或填入，并可参考提示；浓度方法窗口下方标签较多，说明做浓度测定时需要参数较多。用鼠标指按每一标签，可翻出下页，其上有一些需要测定的参数。必须逐页设定。当所需的各项参数都已在参数中设好后，必须用鼠标指按SETUP，才能将仪器调整到所设状态。
3.2扫描：时间驱动，波长编程方法选好后，先放入参比溶液，按AUTOZERO键，进行自动校零或背景校正结束后再放入样品，按START，分光光度计即开始进行，同时屏幕上出现图形窗口，将结果显示出来。浓度：制订标准曲线方法选好后，确认各项数据正确，特别是REFS页中第一行要选中右上角的“edit mode”。再放入参比溶液，按AUTOZERO键自动校零或背景校正。按setup，待该图标消失后，再按“start”，按提示依次放入标准色列的各管溶液，每次都按提示进行操作。标准色列测定，完毕后，屏幕上出现calibgraphwindow，显示拟合的标准线，并标出各项标准管的位置，屏幕下方还有一条Concentration mode的对话框，可以用来修改拟合的曲线类型（按change calbration），或修改标准溶液的任何一管（replace），或取消某一管（delete），或增加标准溶液管数（add）。如过已经满意，则按analyse sample键，进入样品测定窗口。标准曲线有关的各项数据，均在calibresultwindow中，可用鼠标将其调出观察。其中包括每个标准溶液的具体数据，标准曲线的回程方程式，相关系数，残差。
3.3测定：样品浓度测定，刚制定好的标准曲线接着进行样品浓度测定时，只需在concentration mode对话框按analyse sample键，进入样品测定窗口。按设定的样品顺序放入各样品管，每次按提示进行操作。屏幕上出现结果窗口，结果数据将依次显示在样品表中的相应位置。利用原有的标准曲线接着进行样品浓度测定时。调出所测定样品的浓度方法文件，首先调出refs页，将原设edit mode选项取消，改设左上角的using exiting calibration。重新将方法存盘，则今后再调用时即不需再作修改。在sample页中按要求重设各种样品名称机样品信息。按工具条中setup键，将主机设到该方法所设定的条件。将参比溶液放入比色室，按autozero键做背景校零。按start键，按设定的样品顺序放入各样品管，每次按提示进行操作。屏幕上出现结果窗口，结果数据将依次显示在样品表中相应位置。