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摘要：目的：使用高效液相色谱法（HPLC）检测生脉饮中主要活性成分五味子乙素和人参皂甙的含量。
方法：自制3个批次的生脉饮样品溶液及阴性对照溶液。按HPLC法进行检测，绘制上述几种活性成分的色谱图，测定样品溶液五味子乙素和人参皂甙含量。
结果：HPLC图谱各成分色谱峰清晰，各活性成分线性关系良好，精密度、稳定性、重复性之相对标准偏差（RSD）均小于5.0%。
结论：使用高效液相色谱法检测生脉饮中五味子乙素和人参皂甙的含量具有灵敏度高、重复性好、操作简便等优点。
关键词：生脉饮五味子乙素人参皂甙鉴定分析质量控制
【中图分类号】R9【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2013）03-0293-02
生脉饮具有益气生津、养阴复脉等功效，临床上主要用于气阴双虚、心悸气促、脉细自汗等证的治疗[1]。目前临床上对其主要活性成分含量的检测已有多种技术，但考察指标仍较欠缺。本次研究使用高效液相色谱法（HPLC）建立了生脉饮中主要活性成分五味子乙素和人参皂甙（人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1）的含量测定方法，有利于对其成药进行质量控制，现将研究资料报道如下。
1实验材料与方法
1.1仪器及试剂制备。参照《中国药典》2010年版（一部）生脉饮组方，取红参50g、麦冬100克、五味子50克各3份，粉碎为粗粉，分别以5∶1，4∶1，3∶1的比例加入65%乙醇作为溶剂进行渗漉，收集漉液将其浓缩至约200ml，加水300ml稀释制成3个批次的生脉饮样品溶液。对照品人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1、五味子乙素均购自中国食品药品检定研究院。缺红参、五味子的阴性样品按处方工艺自行制备。乙睛为色谱纯，水为重蒸馏水。色谱仪采用LC-2900型高效液相色谱仪，P2910型微机宝石恒流泵。
1.2测定方法。色谱柱：phenomsil C18（4.6mm×250mm，5μm）。流动相：乙睛-水，流速1.2mL·min-1；检测波长：210nm；柱温：30℃。阳性对照品溶液制备：精确称取人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1、五味子乙素，加入甲醇制成对照品混合溶液。各组分含量分别为80.4μg/mL，68.5μg/mL，182μg/mL，146μg/mL，18.2μg/mL。精确称取生脉饮样品溶液20mL，于大孔吸附树脂（D101）加样。先以20%乙醇溶液冲洗两个柱体积，弃之不用，再收集三个柱体积的65%乙醇提取液，浓缩，加甲醇溶解转移到20mL量瓶内定容，过滤膜，留20μL滤液作为样品溶液。按药典组方分别称取剔除红参或五味子的其他药材，参照上述样品溶液制备方法制备不含红参、五味子的阴性对照品。
2结果
取人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1、五味子乙素阳性对照品溶液，样品溶液，以及无红参、五味子阴性对照液在前述色谱条件下进样，获取对应的4张色谱图，详见图1。
该色谱图显示，在阳性对照品色谱图相应的保留时间点，样品溶液也出现了人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1以及五味子乙素的色谱峰。而无红参、五味子阴性对照液在相应位置并未出现上述活性成分的色谱峰。说明生脉饮制剂中其他成分对人参皂甙和五味子乙素的测定没有干扰，该测定条件是可行的。
3讨论
人参皂甙和五味子乙素是生脉饮组方中的主要活性成分，其药理作用的发挥依赖于多种化学成分的协同作用，单一活性成分含量的高低难以全面反映中药复方制剂的疗效[2]。因此，对成药中各种活性成分的定量测定就显得尤为重要。本次研究从生脉饮中的主要活性成分和制备工艺出发，选择了高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为人参皂甙和五味子乙素的测定方法。其原理是将具有不同极性的单一溶液或不同比例的混合溶液、缓冲液等作为流动相泵入置有固定相的色谱柱，在柱中实现各成分的分离，再进入检测器开始测定，从而实现对样品的分析定量[3]。这种分析方法具有高压、高效、高灵敏度、分析速度快、应用范围广等优点[4]。
在具体测定试验中，为使人参皂甙和五味子乙素的5种活性成分能够被同时检测出，笔者先用二极管阵列检测器获得人参皂甙、五味子乙素的最大吸收波长分别，并比较了不同波长下特定成分的色谱图，结果显示在210nm下人参皂甙、五味子乙素的吸收峰均能被检出，故将检测波长确定为210nm。在比较了乙酸乙酯、乙醚、氯仿等溶剂和大孔树脂的提取效果后，发现大孔吸附树脂（D101）的提取率最高，故将其选为生脉饮的提取介质。
同时笔者考虑到生脉饮中人参皂甙和五味子乙素的极性差异较大[5]，试验前考察了多种梯度洗脱系统，结果显示以乙腈-水系统分离效果较佳且峰形较好，故确定采用该流动相体系来完成梯度洗脱。
综合各项指标可以发现，本实验HPLC图谱各成分色谱峰清晰，各活性成分线性关系良好，精密度、稳定性、重复性之相对标准偏差（RSD）均小于5.0%。说明使用高效液相色谱法检测生脉饮中五味子乙素和人参皂甙的含量具有灵敏度高、重复性好、操作简便等优点，可用于生脉饮制剂的活性成分测定和质量控制。
参考文献
[1]张磊.生脉饮的临床应用进展[J].按摩与康复医学，2011，2（10）：49-50
[2]李明，程艳玲，麻京豫.生脉饮内涵、外延及应用探讨[J].中国社区医师：医学专业，2012，14（15）：240-241
[3]蔡小军，许惠琴，方泰惠.生脉饮对气阴两虚型心肌缺血病证结合大鼠模型的研究[J].中药药理与临床，2011，22（2）3-6
[4]陈朝金.生脉饮治疗难治性心力衰竭30例临床观察[J].中医临床研究，2012，4（3）95-96
[5]黄海欣.ELSD一HPLC法测定生脉饮中人参皂昔Re、Rg1和Rb1的含量[J].中国药师2010，13（7）：1045-1046
方法：自制3个批次的生脉饮样品溶液及阴性对照溶液。按HPLC法进行检测，绘制上述几种活性成分的色谱图，测定样品溶液五味子乙素和人参皂甙含量。
结果：HPLC图谱各成分色谱峰清晰，各活性成分线性关系良好，精密度、稳定性、重复性之相对标准偏差（RSD）均小于5.0%。
结论：使用高效液相色谱法检测生脉饮中五味子乙素和人参皂甙的含量具有灵敏度高、重复性好、操作简便等优点。
关键词：生脉饮五味子乙素人参皂甙鉴定分析质量控制
【中图分类号】R9【文献标识码】B【文章编号】1671-8801（2013）03-0293-02
生脉饮具有益气生津、养阴复脉等功效，临床上主要用于气阴双虚、心悸气促、脉细自汗等证的治疗[1]。目前临床上对其主要活性成分含量的检测已有多种技术，但考察指标仍较欠缺。本次研究使用高效液相色谱法（HPLC）建立了生脉饮中主要活性成分五味子乙素和人参皂甙（人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1）的含量测定方法，有利于对其成药进行质量控制，现将研究资料报道如下。
1实验材料与方法
1.1仪器及试剂制备。参照《中国药典》2010年版（一部）生脉饮组方，取红参50g、麦冬100克、五味子50克各3份，粉碎为粗粉，分别以5∶1，4∶1，3∶1的比例加入65%乙醇作为溶剂进行渗漉，收集漉液将其浓缩至约200ml，加水300ml稀释制成3个批次的生脉饮样品溶液。对照品人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1、五味子乙素均购自中国食品药品检定研究院。缺红参、五味子的阴性样品按处方工艺自行制备。乙睛为色谱纯，水为重蒸馏水。色谱仪采用LC-2900型高效液相色谱仪，P2910型微机宝石恒流泵。
1.2测定方法。色谱柱：phenomsil C18（4.6mm×250mm，5μm）。流动相：乙睛-水，流速1.2mL·min-1；检测波长：210nm；柱温：30℃。阳性对照品溶液制备：精确称取人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1、五味子乙素，加入甲醇制成对照品混合溶液。各组分含量分别为80.4μg/mL，68.5μg/mL，182μg/mL，146μg/mL，18.2μg/mL。精确称取生脉饮样品溶液20mL，于大孔吸附树脂（D101）加样。先以20%乙醇溶液冲洗两个柱体积，弃之不用，再收集三个柱体积的65%乙醇提取液，浓缩，加甲醇溶解转移到20mL量瓶内定容，过滤膜，留20μL滤液作为样品溶液。按药典组方分别称取剔除红参或五味子的其他药材，参照上述样品溶液制备方法制备不含红参、五味子的阴性对照品。
2结果
取人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1、五味子乙素阳性对照品溶液，样品溶液，以及无红参、五味子阴性对照液在前述色谱条件下进样，获取对应的4张色谱图，详见图1。
该色谱图显示，在阳性对照品色谱图相应的保留时间点，样品溶液也出现了人参皂甙Re、人参皂甙Rd、人参皂甙Rb1、人参皂甙Rg1以及五味子乙素的色谱峰。而无红参、五味子阴性对照液在相应位置并未出现上述活性成分的色谱峰。说明生脉饮制剂中其他成分对人参皂甙和五味子乙素的测定没有干扰，该测定条件是可行的。
3讨论
人参皂甙和五味子乙素是生脉饮组方中的主要活性成分，其药理作用的发挥依赖于多种化学成分的协同作用，单一活性成分含量的高低难以全面反映中药复方制剂的疗效[2]。因此，对成药中各种活性成分的定量测定就显得尤为重要。本次研究从生脉饮中的主要活性成分和制备工艺出发，选择了高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为人参皂甙和五味子乙素的测定方法。其原理是将具有不同极性的单一溶液或不同比例的混合溶液、缓冲液等作为流动相泵入置有固定相的色谱柱，在柱中实现各成分的分离，再进入检测器开始测定，从而实现对样品的分析定量[3]。这种分析方法具有高压、高效、高灵敏度、分析速度快、应用范围广等优点[4]。
在具体测定试验中，为使人参皂甙和五味子乙素的5种活性成分能够被同时检测出，笔者先用二极管阵列检测器获得人参皂甙、五味子乙素的最大吸收波长分别，并比较了不同波长下特定成分的色谱图，结果显示在210nm下人参皂甙、五味子乙素的吸收峰均能被检出，故将检测波长确定为210nm。在比较了乙酸乙酯、乙醚、氯仿等溶剂和大孔树脂的提取效果后，发现大孔吸附树脂（D101）的提取率最高，故将其选为生脉饮的提取介质。
同时笔者考虑到生脉饮中人参皂甙和五味子乙素的极性差异较大[5]，试验前考察了多种梯度洗脱系统，结果显示以乙腈-水系统分离效果较佳且峰形较好，故确定采用该流动相体系来完成梯度洗脱。
综合各项指标可以发现，本实验HPLC图谱各成分色谱峰清晰，各活性成分线性关系良好，精密度、稳定性、重复性之相对标准偏差（RSD）均小于5.0%。说明使用高效液相色谱法检测生脉饮中五味子乙素和人参皂甙的含量具有灵敏度高、重复性好、操作简便等优点，可用于生脉饮制剂的活性成分测定和质量控制。
参考文献
[1]张磊.生脉饮的临床应用进展[J].按摩与康复医学，2011，2（10）：49-50
[2]李明，程艳玲，麻京豫.生脉饮内涵、外延及应用探讨[J].中国社区医师：医学专业，2012，14（15）：240-241
[3]蔡小军，许惠琴，方泰惠.生脉饮对气阴两虚型心肌缺血病证结合大鼠模型的研究[J].中药药理与临床，2011，22（2）3-6
[4]陈朝金.生脉饮治疗难治性心力衰竭30例临床观察[J].中医临床研究，2012，4（3）95-96
[5]黄海欣.ELSD一HPLC法测定生脉饮中人参皂昔Re、Rg1和Rb1的含量[J].中国药师2010，13（7）：1045-1046