论文部分内容阅读
Da-dio5基因是大薯(Dioscorea alata L.) Dioscorin蛋白合成途径中的关键基因.CRISPR/Cas9基因编辑系统早已广泛应用于各种作物的遗传育种.为了研究该基因在大薯块茎储藏蛋白形成过程中的作用机理,构建Da-dio5基因的CRISPR-Cas9敲除载体.本研究利用随机引物法、巢式PCR、启动子库三种方法扩增U3启动子,将U3启动子与水稻(Oryza sativa L.) CRISPR/Cas9载体(pCAMBIA1301-PosU3gRNA-2NL-Scas9)相连接,构建大薯内源的CRISPR/Cas9通用表达载体(pCAMBIA 1301-DaU3pro-2NLS cas9+35T),将Da-dio5靶标序列与大薯通用表达载体相连构建大薯Da-dio5-CRISPR-Cas9基因敲除载体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化大薯,并成功得到的转基因阳性植株.