【摘 要】
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目的 探讨胞嘧啶脱氨酶 (Cytimidinedeaminase ,CD)基因修饰神经干细胞及其基因表达。方法 通过构建真核表达质粒pCMVCD ,限制性内切酶消化鉴定后 ,采用Lipofectamine 2 0
【机 构】
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第三军医大学附属新桥医院神经外科,中南大学湘雅医院神经外科,第三军医大学附属新桥医院神经外科,第三军医大学附属新桥医院神经外科,第三军医大学附属新桥医院神经外科,DepartmentofUrology
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目的 探讨胞嘧啶脱氨酶 (Cytimidinedeaminase ,CD)基因修饰神经干细胞及其基因表达。方法 通过构建真核表达质粒pCMVCD ,限制性内切酶消化鉴定后 ,采用Lipofectamine 2 0 0 0脂质体介导法转染新生大鼠室管膜下区神经干细胞 (Neuralstemcells ,NSCs) ,G418筛选阳性克隆 ,加入不同浓度的 5 氟胞嘧啶 ( 5 Flourocytosine ,5 FC) ,MTT比色法测定NSCs的生存率。结果 本实验成功地培养并鉴定了神经干细胞 ,并将CD基因成功地转染了神经干细胞 ,G418阳性NSCs对低浓度 5 FC高度敏感。结论 CD基因修饰神经干细胞的离体实验研究为干细胞治疗研究提供依据
Objective To investigate the gene expression of neural stem cells modified with cytosine deaminase (CD) gene. Methods The eukaryotic expression plasmid pCMVCD was constructed and identified by restriction endonuclease digestion. Neural stem cells (NSCs) were induced by lipofectamine 2000 liposome in the subependymal zone of neonatal rats, and then screened by G418 Positive clones were treated with different concentrations of 5 Flourocytosine (5 FC). The survival rate of NSCs was determined by MTT assay. Results In this study, neural stem cells were successfully cultured and identified, and CD gene was successfully transfected into neural stem cells. G418-positive NSCs were highly sensitive to low concentration 5 FC. Conclusion The in vitro study of CD gene modified neural stem cells provides the basis for stem cell therapy research
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