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【摘要】目的：分析血必净注射液中丹参素含量测定中高效液相色谱法（HPLC）法的应用。方法：采用KromasiC18（20mm×4.6mm，5μm）色谱柱；甲醇：冰醋酸（15：85）为流动相梯度洗脱，流速为1.0mL/min；检验波长为280nm；柱温为30℃的条件下对血必净注射液中丹参素含量进行测定。结果：丹参素进样量在0.03841～0.38570μg时线性关系良好（r=0.9999）；精密度RSD=0.79%（n=5）；重复性RSD=1.26%（n=5）；平均回收率为97.96%，RSD为1.67%（n=10）；采用阴性空白试验，在丹参素对照峰位置，未发现其它干扰峰。结论：HPLC测定血必净注射液中丹参素含量操作简单，结果准确。
【关键词】血必净注射液；丹参素；高效液相色谱法
血必净注射液属于葡萄糖注射液，其主要作用为化瘀解毒，在临床中广泛用于治疗多器官功能失常综合征。有研究表明，血必净注射液能够改善组织血液循环，抗细胞凋亡作用。丹参中含有丰富的丹参素，在其法含量测量方法中，未发现丹参素具体测量方法。基于此，本研究采用高效液相色谱仪（high performance liquid chromatography，HPLP）测定血必净注射液中丹参素含量，以期为此类药物中丹参素含量测定提供参考依据。
1研究资料与方法
1.1仪器与试药
采用Agilent 1100高效液相色谱仪；Agilent 1100色谱工作站数据处理系统；SPD-M20A二极管阵列检测器；血必净注射液（规格：10mL，批准文号：国药准字Z20040033）由天津红日药业股份有限公司提供。丹参素钠对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇由山东禹王实业有限公司化工分公司提供，水为蒸馏水。
1.2制备溶液
对照品溶液制备：精密量取丹参素钠对照品后加入甲醇，将其制成1mL含有0.01928mg丹参素的对照品溶液。
供试品溶液制备：精密量取10mL血必净注射液，加入适量甲醇，混合均匀后采用微孔滤膜进行滤过处理。
1.3色谱条件
色谱条件为：KromasiC18色谱柱（20mm×4.6mm，5μm）；检验波长设置为280nm；流动相甲醇：冰醋酸（15：85），流速设置为1.0mL/min；柱温设置为30℃；进样量为10μL。在符合色谱条件下，色谱柱塔板数按照丹参素峰面积计算，理论上不低于3000，样品中丹参素与其临近成分均符合基线分离，与阴性对照不存在干扰。
2结果
2.1线性范围
分别精密量取丹参素钠对照品溶液0.5mL、2mL、4mL、8mL置于量瓶中，加入甲醇混合均匀，依据上述液相色谱条件，分别进样10μL，观察并测定峰面积，其中进样量与色谱峰面积分别为横坐标、纵坐标，将其进行线性回归，则得出回归方程：Y=743.1034215X-0.3420（r=0.9999），线性范围为0.03841～0.38570μg。表明，丹参素在上述范围内线性关系良好。
2.2精密度试验
精密量取丹参素钠对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，重复进样5次，则精密度RSD=0.79%（n=5）。
2.3重复性试验
精密量取同一生产批号的血必净注射液样品，按照供试品溶液方法进行制备，等量量取5份，注入液相色谱仪，分别进样10μL，重复测量5次，测定丹参素平均含量为0.03814mg/mL，重复性RSD=1.26%（n=5）。
2.4加样回收率试验
分别精密量取同一生产批号的血必净注射液10份，每份均为5mL，分别加入丹参素钠对照品溶液5mL，并分别加入适量甲醇混合均匀，在符合上述色谱条件下，分别进样5μL，测得平均回收率为97.96%，RSD为1.67%（n=10），该试验符合要求。
2.5阴性空白试验
精密量取红花、当归、芍药以及川穹，分别用甲醇和水沉2次，加入葡萄糖溶液，制成阴性样品，其测定结果为，在丹参素对照峰位置，未发现其它干扰峰。
2.6丹参素含量测定
分别精密量取不同生产批号的血必净注射液，按照供试品制备方法将其制成供试液，在符合上述色谱条件下分别进样5μL，并测定其中丹参素含量，详见表1。
3討论
流动相选择：本研究分别对甲醇-冰醋酸、甲醇-水、乙腈-甲醇、乙腈-水等溶剂进行考察，结果显示将甲醇-冰醋酸（15：85）作为流动相，蒸馏水作为水相进行梯度洗脱，则血必净注射液中所含化合物分离效果较好，且基线处于稳定状态。
检验波长选择：采用二极管阵列检测器检测血必净注射液的色谱图，经对比发现，在不同色谱条件下，在280nm时丹参素有最大吸收，且其余杂质峰对该波长的干扰较小。采用二极管阵列检测器对丹参素峰纯度进行考察，确定不含有杂质峰。
综上所述，本研究采用HPLC法对其中丹参素含量进行测定，操作简单，准确度高，值得临床推广和使用。
参考文献：
[1]李国松，胡中立. HPLC法测定丹红注射液中5种水溶性成分的含量[J]. 北方药学，2015，12（03）：14-15.
[2]余胜丽. HPLC法测定血必净注射液中丹参素含量[J]. 中西医结合研究，2011，3（04）：179-181.
[3]尤慧莲，汪冰，徐丽华. HPLC法测定丹红注射液中4种水溶性成分的含量[J]. 中国药事，2012，26（07）：743-746.
[4]袁鲜云，庞晓斌. 丹红注射液中总黄酮、丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B含量测定[J]. 陕西中医学院学报，2011，34（05）：88-89.
作者简介：
1.张坤（1994-）男 汉 河南省驻马店 本科 药物制剂 。
2.刘金海（1989-）男 汉 河南省新郑市 本科 药物制剂。
【关键词】血必净注射液；丹参素；高效液相色谱法
血必净注射液属于葡萄糖注射液，其主要作用为化瘀解毒，在临床中广泛用于治疗多器官功能失常综合征。有研究表明，血必净注射液能够改善组织血液循环，抗细胞凋亡作用。丹参中含有丰富的丹参素，在其法含量测量方法中，未发现丹参素具体测量方法。基于此，本研究采用高效液相色谱仪（high performance liquid chromatography，HPLP）测定血必净注射液中丹参素含量，以期为此类药物中丹参素含量测定提供参考依据。
1研究资料与方法
1.1仪器与试药
采用Agilent 1100高效液相色谱仪；Agilent 1100色谱工作站数据处理系统；SPD-M20A二极管阵列检测器；血必净注射液（规格：10mL，批准文号：国药准字Z20040033）由天津红日药业股份有限公司提供。丹参素钠对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇由山东禹王实业有限公司化工分公司提供，水为蒸馏水。
1.2制备溶液
对照品溶液制备：精密量取丹参素钠对照品后加入甲醇，将其制成1mL含有0.01928mg丹参素的对照品溶液。
供试品溶液制备：精密量取10mL血必净注射液，加入适量甲醇，混合均匀后采用微孔滤膜进行滤过处理。
1.3色谱条件
色谱条件为：KromasiC18色谱柱（20mm×4.6mm，5μm）；检验波长设置为280nm；流动相甲醇：冰醋酸（15：85），流速设置为1.0mL/min；柱温设置为30℃；进样量为10μL。在符合色谱条件下，色谱柱塔板数按照丹参素峰面积计算，理论上不低于3000，样品中丹参素与其临近成分均符合基线分离，与阴性对照不存在干扰。
2结果
2.1线性范围
分别精密量取丹参素钠对照品溶液0.5mL、2mL、4mL、8mL置于量瓶中，加入甲醇混合均匀，依据上述液相色谱条件，分别进样10μL，观察并测定峰面积，其中进样量与色谱峰面积分别为横坐标、纵坐标，将其进行线性回归，则得出回归方程：Y=743.1034215X-0.3420（r=0.9999），线性范围为0.03841～0.38570μg。表明，丹参素在上述范围内线性关系良好。
2.2精密度试验
精密量取丹参素钠对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，重复进样5次，则精密度RSD=0.79%（n=5）。
2.3重复性试验
精密量取同一生产批号的血必净注射液样品，按照供试品溶液方法进行制备，等量量取5份，注入液相色谱仪，分别进样10μL，重复测量5次，测定丹参素平均含量为0.03814mg/mL，重复性RSD=1.26%（n=5）。
2.4加样回收率试验
分别精密量取同一生产批号的血必净注射液10份，每份均为5mL，分别加入丹参素钠对照品溶液5mL，并分别加入适量甲醇混合均匀，在符合上述色谱条件下，分别进样5μL，测得平均回收率为97.96%，RSD为1.67%（n=10），该试验符合要求。
2.5阴性空白试验
精密量取红花、当归、芍药以及川穹，分别用甲醇和水沉2次，加入葡萄糖溶液，制成阴性样品，其测定结果为，在丹参素对照峰位置，未发现其它干扰峰。
2.6丹参素含量测定
分别精密量取不同生产批号的血必净注射液，按照供试品制备方法将其制成供试液，在符合上述色谱条件下分别进样5μL，并测定其中丹参素含量，详见表1。
3討论
流动相选择：本研究分别对甲醇-冰醋酸、甲醇-水、乙腈-甲醇、乙腈-水等溶剂进行考察，结果显示将甲醇-冰醋酸（15：85）作为流动相，蒸馏水作为水相进行梯度洗脱，则血必净注射液中所含化合物分离效果较好，且基线处于稳定状态。
检验波长选择：采用二极管阵列检测器检测血必净注射液的色谱图，经对比发现，在不同色谱条件下，在280nm时丹参素有最大吸收，且其余杂质峰对该波长的干扰较小。采用二极管阵列检测器对丹参素峰纯度进行考察，确定不含有杂质峰。
综上所述，本研究采用HPLC法对其中丹参素含量进行测定，操作简单，准确度高，值得临床推广和使用。
参考文献：
[1]李国松，胡中立. HPLC法测定丹红注射液中5种水溶性成分的含量[J]. 北方药学，2015，12（03）：14-15.
[2]余胜丽. HPLC法测定血必净注射液中丹参素含量[J]. 中西医结合研究，2011，3（04）：179-181.
[3]尤慧莲，汪冰，徐丽华. HPLC法测定丹红注射液中4种水溶性成分的含量[J]. 中国药事，2012，26（07）：743-746.
[4]袁鲜云，庞晓斌. 丹红注射液中总黄酮、丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B含量测定[J]. 陕西中医学院学报，2011，34（05）：88-89.
作者简介：
1.张坤（1994-）男 汉 河南省驻马店 本科 药物制剂 。
2.刘金海（1989-）男 汉 河南省新郑市 本科 药物制剂。