【摘 要】
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目的:研究M3受体对小鼠心肌缺血再灌注损伤性心律失常的保护作用,并探讨其可能的机制。
方法:①构建过表达M3受体[M3(+/+)]转基因小鼠,并应用real-time PCR技术、Wester
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目的:研究M3受体对小鼠心肌缺血再灌注损伤性心律失常的保护作用,并探讨其可能的机制。
方法:①构建过表达M3受体[M3(+/+)]转基因小鼠,并应用real-time PCR技术、Western blot技术分别从基因、蛋白水平验证M3受体是否过表达。结扎左冠状动脉前降支30分再灌注2小时,制备Ma(+/+)转基因小鼠、野生型(Wild-Type,WT)小鼠缺血再灌性心律失常模型,并以此模型为基础做如下实验:②记录小鼠标准Ⅱ导联心电图,观察其心律失常发生率、死亡率;③取心脏,酶解法分离成单个心肌细胞,应用全膜片钳技术检测Ik1电流强度;④取心肌组织,应用Western-blot技术检测Kir2.1蛋白含量的改变,并应用real-timePCR技术检测编码Kir2.1的基因KCNJ2 mRNA水平的改变;⑤取心肌组织,应用real-time PCR技术,检测microRNA.-(miR-1)改变量。
结果:M3(+/+)转基因小鼠、Wild-Type小鼠给予心肌缺血再灌后,得到如下结果:①通过对标准Ⅱ导联心电图的分析,M3(+/+)转基因小鼠房室传导阻滞出现时间明显延迟,心律失常评分显著降低,死亡率明显下降(P＜0.05,与Wild-Type小鼠相比)。②细胞膜片钳结果显示,M3(+/+)转基因小鼠Ik1电流密度明显增高。(P＜0.05,与Wild-Type小鼠相比)③分子生物学结果显示:M3(+/+)转基因小鼠与WT小鼠相比,Kir2.1蛋白含量明显增高,但Kir2.1编码基因KCNJ2 mRNA水平无显著变化。④应用real-time PCR技术检测结果表明:M3(+/+)转基因小鼠miR-1表达量,明显低于WT小鼠。
结论:
①M3受体对心肌缺血30min,再灌2小时损伤诱发的心律失常具有保护作用。
②其保护机制可能是通过降低miR-1的表达,进而增强Kir2.1蛋白表达,从而增强Ik1电流密度,抑制了心律失常的发生。
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