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目的:本实验运用RNA技术下调VEGF基因在HeLa细胞中的表达,观察其对肿瘤细胞凋亡的影响,为人宫颈癌的治疗提供理论依据。
方法:设计并构建针对VEGF的携带绿色荧光蛋白(GFP)发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体(PGPU6/GFP/Neo-shRNA),脂质体法转染HeLa细胞;荧光显微镜观察GFP的表达,并计算转染效率;RT-PCR检测HeLa细胞VEGF的表达,筛选出干扰效果最好的作为靶序列;再用流式细胞仪检测其对HeLa细胞凋亡的影响。
结果:荧光显微镜结果表明,构建的PGPU6/GFP/Neo载体成功转入HeLa细胞,转染效率为75.0%;RT-PCR结果显示,转染48h后,HeLa-shVEGF1组显著抑制了HeLa细胞VEGF mRNA表达,抑制率为75.0%;流式细胞仪检测结果提示,与HeLa组和HeLa-shNC组相比,HeLa-shVEGF1组HeLa细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。
结论:本课题构建的PGPU6-shRNA表达载体携带GFP便于观察细胞的转染情况,且不影响U6启动子的转录,同时有效沉默了VEGF基因,明显增加HeLa细胞的凋亡,为未来肿瘤的治疗提供新途径。