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RLR信号通路中关键的接头分子是MAVS,它是信号转导过程中必不可少的一环。MAVS的活化,是机体抗病毒天然免疫应答中不可缺少的一步。然而,目前对于调控MAVS活化的分子机制的研究尚未完善。在这一过程中,泛素化具有重要作用。研究发现,在受到SeV或EMCV病毒感染后,定位在线粒体上的去泛素化酶USP18能够特异性的与MAVS相互作用,促进其K63位泛素化使其聚集,从而上调Ⅰ型干扰素的表达和分泌。在体内抗病毒实验中发现,USP18基因缺失的小鼠更易受到RNA病毒的感染。从机制上讲,USP18作为一个平台,能够促进TRIM31的转位,从而增强TRIM31与MAVS的结合。这些结果表明,USP18在MAVS介导的抗病毒信号通路中具有重要作用,从而完善了 MAVS活化的调控机制。研究目的一系列研究表明,蛋白质的翻译后修饰（PTM）在MAVS活性的调控中具有重要作用。并且,本实验室及其他实验室的研究都发现,泛素化对于调控MAVS的活化和稳定是必不可少的。研究发现,一些E3泛素连接酶能够调控MAVS K63、K27和K48位泛素化修饰,如TRIM31、TRIM21和SMURF1。泛素化是一个由E3泛素连接酶和去泛素化酶（DUBs）共同维持的可逆过程。因此,DUBs在调节MAVS的降解和活化中也发挥着重要的作用。但是,这些E3泛素连接酶和DUBs如何协同调控MAVS的泛素化水平,还需要进一步的研究。研究方法与结果1.去泛素化酶筛选1.1 筛选定位在线粒体上的DUBs利用Psort Wolf软件（https://wolfpsort.hgc.jp/）预测线粒体中DUBs定位的可能性。将大约100个DUBs的蛋白序列输入网站,统计它们在线粒体上含量的百分比。统计结果显示,有13个DUBs可能定位在线粒体上,它们在线粒体上的分布均超过20%。其中USP30是已经报道的定位在线粒体上的去泛素化酶,这说明我们的筛选具有可行性。1.2 筛选参与调节MAVS泛素化的DUBs在HEK293T细胞中共转染MAVS,泛素以及上述13个DUBs的质粒,收取细胞后,用MAVS的标签抗体做IP实验,用Western Blot检测MAVS的泛素化水平。结果显示,与USP18共转可以明显增强MAVS的泛素化水平;OTUD3和USP2能够降低MAVS的泛素化水平,同时也能降低细胞总体泛素化水平,它们对MAVS泛素化的调控可能不具有特异性。2.病毒感染对USP18的调控2.1 病毒感染对USP18表达的影响用SeV病毒对人THP-1细胞以及小鼠原代腹腔巨噬细胞（PMs）进行感染,用qPCR和Western Blot分别检测了 RNA病毒感染不同时间点后USP18的mRNA水平和蛋白水平。结果显示,SeV病毒感染后,THP-1细胞和PMs中USP18的mRNA水平和蛋白水平均升高。2.2 病毒感染对USP18定位的影响SeV病毒感染THP-1细胞,分离胞浆、线粒体和内质网组分,通过Western Blot检测USP18的蛋白水平。结果显示,SeV病毒感染后,USP18在线粒体组分中的表达增多,在内质网以及胞浆组分中的表达不变,说明病毒感染后,USP18在线粒体上发生富集。3.USP18正向调控RNA信号通路3.1 USP18敲低对RNA信号通路的影响在THP-1细胞中转染USP18小干扰RNA,用qPCR和Western Blot分别检测了 RNA病毒感染不同时间点后USP18的mRNA水平和蛋白水平,接着通过qPCR检测IFVB和下游CCl5的mRNA水平。取PMs转染USP18小干扰RNA,SeV或EMCV感染后,通过qPCR和ELISA分别检测Ifnb的mRNA水平和IFN-β的分泌。结果显示,转染USP18小干扰RNA后,USP18的mRNA水平和蛋白水平明显下降。在THP-1细胞中敲低USP18,能够降低SeV病毒感染引起的IFNB和下游CCl5 mRNA的表达。在PMs中敲低USP18,能够降低SeV或EMCV感染引起的Ifnb mRNA的表达和IFN-β的分泌。3.2 USP18敲除对IFN-β的影响取Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的PMs,SeV或EMCV感染后,通过qPCR检测Ifnb和下游Ccl5的mRNA水平,通过ELISA检测IFN-β的分泌。取Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的MEFs,SeV或EMCV感染后,通过qPCR检测Ifnb和下游Ccl5的mRNA水平,通过ELISA检测IFN-β的分泌;病毒RNA的类似物低分子量和高分子量的Poly（I:C）转染后,通过qPCR检测Ifnb的mRNA水平。结果显示,敲除USP18能够降低SeV或EMCV感染引起的Ifnb和下游Ccl5 mRNA的表达以及IFN-β的分泌,也能够降低Poly（I:C）转染引起的Ifnb mRNA的表达。3.3 USP18敲除对RNA通路信号转导的影响取Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的MEFs,SeV感染后,通过Western Blot检测TBK1和IRF3的磷酸化,通过Native-PAGE检测IRF3的二聚化。结果显示,USP18敲除之后,SeV感染引起的TBK1和IRF3的磷酸化和IRF3的二聚化水平均下降。3.4 IFN-β和IFNAR对USP18调控RNA信号通路的影响预处理MEFs后加SeV感染,通过qPCR检测Usp18的mRNA水平。取Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的MEFs,IFN-β和α-IFNAR预处理细胞后加SeV感染,通过qPCR检测Ifnb的mRNA水平。结果显示,α-IFNAR预处理MEFs后加SeV感染,Usp18的mRNA水平下降,Ifnb的mRNA水平总体下降。IFN-β预处理细胞后加SeV感染,Ifnb的mRNA水平总体升高。4.USP18的抗病毒作用4.1 USP18过表达对抗病毒的影响将USP18或GFP的质粒梯度共转染进HEK293T细胞中,24小时后加SeV感染,通过Western Blot检测SeV,pIRF3的蛋白水平。结果显示,USP18梯度过表达后,SeV的蛋白表达降低,pIRF3水平升高。GFP的梯度过表达不影响SeV和pIRF3的蛋白水平。4.2 USP18敲除对抗病毒的影响取Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的MEFs,SeV感染后,通过Western Blot检测SeV的蛋白水平。结果显示,USP18敲除能够增加SeV的蛋白表达。5.USP18抗病毒的生理意义5.1 USP18对小鼠免疫系统发育的影响取同窝生6-8周Usp18+/+和Usp18-/-小鼠,处死后,分离出胸腺、脾脏和淋巴结,研磨,加入对应的流式抗体进行标记,通过流式细胞术对其中的T细胞,B细胞,DC细胞和巨噬细胞的含量进行检测。结果显示,USP18敲除小鼠各器官中免疫细胞的含量与野生型小鼠相比没有明显差异,说明USP18对小鼠免疫系统的发育没有影响。5.2 USP18对小鼠抵抗VSV病毒感染的作用通过腹腔注射VSV-GFP对Usp18+/+和Usp18-/-小鼠进行感染,48小时后,对小鼠进行眼球取血,取血清进行ELISA实验,检测小鼠血清中IFN-β的分泌。接着处死小鼠,取小鼠的肺脏进行苏木精-伊红染色,检测小鼠肺部免疫细胞的浸润和损伤程度,取小鼠的大脑,脾脏、肝脏和肺组织研磨的上清进行病毒空斑实验,检测VSV滴度,取小鼠脾脏、肝脏和肺进行裂解,通过Western Blot检测组织中VSV蛋白的表达。并且做了小鼠的致死实验,分别记录VSV-GFP注射后小鼠的死亡情况。结果显示,VSV病毒感染后,Usp18-/-小鼠血清中干扰素-β的水平要明显低于Usp18+/+小鼠;苏木精-伊红染色显示,VSV感染后,与Usp18+/+小鼠相比,Usp18-/-小鼠肺部免疫细胞的浸润和损伤程度更大;Usp18-/-小鼠大脑、脾脏、肝脏和肺中VSV滴度显著高于Usp18+/+小鼠;Usp18-/-小鼠的脾脏、肝脏和肺中VSV-GFP蛋白的表达显著高于Usp18+/+小鼠;Usp18-/-小鼠感染后出现更严重的瘫痪症状,生存时间显著减少。上述实验说明USP18敲除的小鼠对VSV病毒的抵抗能力明显下降。6.USP18与MAVS的相互作用6.1 USP18与MAVS相互作用的特异性在HEK293T细胞中共转染RLR信号通路中各信号分子和USP18的质粒,用USP18的标签抗体进行免疫共沉淀,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中各信号分子的蛋白水平。结果显示,USP18与MAVS检测到明显的相互作用,其他分子没有或仅有微弱的相互作用,说明USP18特异性地作用于MAVS。6.2 USP18与MAVS的内源相互作用在THP-1细胞和RAW264.7细胞中加SeV感染,用MAVS的抗体做IP实验,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中USP18的蛋白水平。结果显示,随着SeV的感染,免疫沉淀复合物中USP18的蛋白水平升高,说明USP18与MAVS存在内源相互作用。6.3 USP18与MAVS在线粒体上的相互作用在THP-1细胞中加SeV感染,对细胞的线粒体组分进行分离,用MAVS的抗体进行免疫共沉淀,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中USP18的蛋白水平。随着SeV的感染,免疫沉淀复合物中USP18的蛋白水平升高,说明USP18与MAVS在线粒体上的结合增强。6.4 USP18与MAVS在细胞内的定位情况在HeLa细胞中过表达Myc-USP18与Flag-MAVS,通过免疫荧光实验以及原位邻近连接实验（in situ proximity ligation assay,PLA）检测 USP18 与 MAVS在细胞内的定位情况。在THP-1细胞加SeV感染,通过原位邻近连接实验检测USP18与MAVS在细胞内的定位情况。结果显示,过表达Myc-USP18后,在共聚焦显微镜下能够看到USP18与MAVS之间存在明显的共定位。Myc-USP18与对照Flag空载共转染时未见红点,而Myc-USP18和Flag-MAVS共转染后出现大量红点。在SeV感染后,内源性USP18-MAVS复合物的斑点数量显著增加。以上结果说明USP18与MAVS在细胞内发生共定位。6.5 USP18与MAVS相互作用的结构域。在HEK293T细胞中共转染MAVS的不同截短体和USP18的质粒,用MAVS的标签抗体进行免疫共沉淀,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中USP18的蛋白水平。结果显示,ΔTM截短体能够与USP18相互作用,单N截短体不能与USP18相互作用,而单独两个截短体之间相差的部分173-513的截短体又能与USP18发生相互作用。说明MAVS与USP18发生相互作用的区域就是173-513这段结构域。7.USP18调控MAVS的泛素化7.1 USP18调控MAVS的泛素化的特异性在HEK293T细胞中共转染RLR信号通路中各信号分子、泛素以及USP18的质粒,STING作为对照。24小时后收取细胞,用信号分子的标签抗体做IP实验,用Western Blot检测各分子的泛素化水平。结果显示,MAVS的泛素化水平显著升高,其他分子的泛素化水平没有明显变化,STING的泛素化水平降低,说明在RNA信号通路中USP18能够特异性的调控MAVS的特异性,STING作为对照。7.2 USP18调控MAVS的泛素化形式在HEK293T细胞中共转染MAVS,只有K48或K63形式的泛素以及USP18的质粒,24小时后收取细胞,用MAVS的标签抗体做IP实验,用Western Blot检测MASV的泛素化水平。结果显示,USP18过表达可以提高MAVS K63位泛素化水平,不能提高MAVS K48位泛素化水平。7.3 USP18调控MAVS的内源泛素化在RAW264.7细胞中,将对照siRNA和靶向Usp18基因的siRNA转入细胞,48小时后,进行SeV感染,用MAVS的抗体做IP实验,用Western Blot检测MAVS野生型和K63位泛素化水平。在Usp18+/+和Usp18-小鼠的MEFs中加入SeV感染后收取细胞,在细胞裂解液中加入GST-K63-TUBE共孵育,之后加GST beads进行免疫沉淀,富集了 K63位泛素化修饰的蛋白,用Western Blot检测MAVS的蛋白水平。结果显示,siRNA敲低USP18导致SeV感染引起的MAVS野生型和K63位泛素化修饰减少。USP18敲除降低细胞中SeV感染引起的K63位泛素化修饰的MAVS减少。7.4 USP18调控STING的内源泛素化在RAW264.7细胞中,将对照siRNA和靶向Usp18基因的siRNA转入细胞48小时后,转染HSV60,用STING的抗体做IP实验,用Western Blot检测STING野生型和K48位泛素化水平。在Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的MEFs中转染HSV60,用STING的抗体做IP实验,用Western Blot检测STING K48位泛素化水平。结果显示,siRNA敲低USP18导致HSV60引起的STING野生型和K48位泛素化修饰减少;USP18敲除降低细胞中HSV60引起的K48位泛素化修饰的STING减少,与之前的报道一致。8.USP18调控MAVS的聚集8.1 USP18过表达对MAVS聚集的调控在HEK293T细胞中过表达Flag-MAVS和Myc-USP18或Myc空载体,24小时后收取细胞提取线粒体,利用半变性琼脂糖凝胶电泳（SDD-AGE）对MAVS的多聚化进行分析。结果显示,与对照组Myc载体相比,过表达USP18能够导致更多的MAVS聚集体形成。8.2 USP18过表达对MAVS和线粒体形态的影响将 Flag-MAVS,DsRED2-Mito 和 Myc-USP18 或 Myc 空载体共同转染进 HeLa细胞,通过免疫荧光实验观察MAVS和线粒体的形态。结果显示,将USP18和MAVS共同转染能够增加MAVS的聚集,在显微镜下能够看到线粒体骨架长度的缩短和基质区域的减少。8.3 USP18敲除对MAVS聚集的影响在Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的MEFs中加入SeV感染后,通过SDD-AGE和免疫荧光实验检测MAVS的聚集。结果显示,SeV感染后Usp18-/-MEF中MAVS的聚集较Usp18+/+MEF明显减少。9.USP18对MAVS稳定性的影响9.1过表达USP18对MAVS稳定性的影响将USP18梯度转染进HEK293T细胞中,用Western Blot检测MAVS的内源蛋白水平。结果显示,过表达USP18对内源MAVS的蛋白水平没有明显影响。9.2敲除USP18对MAVS稳定性的影响在Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的MEFs中加入SeV感染后,通过Western Blot检测MAVS的蛋白水平。结果显示,USP18敲除对内源MAVS的蛋白水平没有明显影响。9.3敲除USP18对MAVS降解速率的影响在Usp18+/+和Usp18-/-小鼠的MEFs中加入环己酰亚胺（CHX）处理,通过Western Blot检测MAVS的蛋白水平。结果显示,USP18敲除对MAVS的降解速率没有影响。10.USP18酶活性的作用10.1 USP18酶活突变体构建通过点突变试剂盒构建USP18酶活突变体。10.2 USP18酶活突变体与MAVS的相互作用在 HEK293T 细胞中共转染 Flag-MAVS 和 Myc-USP18 或 USP18C64S,用USP18或MAVS的标签抗体做IP实验,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中MAVS或USP18的蛋白水平。结果显示,无论是用MAVS进行Co-IP,还是用USP18进行Co-IP,USP18C64S与野生型USP18都没有任何区别,这说明USP18与MAVS的相互作用不依赖其酶活性。10.3 USP18酶活突变体对MAVS泛素化水平的影响在HEK293T细胞中共转染MAVS,野生型或只有K63形式的泛素以及USP18和USP18C64S的质粒,24小时后收取细胞,用MAVS的标签抗体做IP实验,用Western Blot检测MAVS的泛素化水平。结果显示,USP18C64S和野生型对MAVS泛素化的调控没有区别,这说明USP18调控MAVS的泛素化不依赖其酶活性。10.4 USP18酶活突变体对MAVS聚集的影响在 HEK293T 细胞中共转染 Flag-MAVS 和 Myc-USP18 或 USP18C64S,24 小时以后收取细胞提取线粒体,利用SDD-AGE和免疫荧光实验对MAVS的多聚化进行分析。结果显示,USP18C64S同样能够增强MAVS的多聚化,与野生型相比并无明显差异,这说明USP18调控MAVS的聚集不依赖其酶活性。10.5 USP18酶活突变体对RNA信号通路的作用影响在HEK293T细胞中梯度过表达USP18或USP18C64s,通过Western Blot检测pIRF3和SeV病毒蛋白的表达水平。结果显示,USP18或USP18C64S的过表达都能引起pIRF3水平的升高,同时降低SeV病毒蛋白的表达水平,这说明USP18对RNA信号通路的调控作用不依赖其酶活性。11.TRIM31参与USP18对MAVS泛素化的调控11.1 TRIM31敲低对USP18调控MAVS泛素化的影响在HEK293T细胞中将对照siRNA和靶向TRIM31基因的siRNA转入细胞,24小时后,共转染MAVS,只有K63形式的泛素以及USP18的质粒,24小时后收取细胞,用MAVS的标签抗体做IP实验,用Western Blot检测MAVS的泛素化水平。结果显示,敲低TRIM31导致USP18增强MAVS K63位泛素化水平减弱。11.2 TRIM31敲除对USP18增强MAVS泛素化的影响分别在在Trim31+/+和Trim31-/-小鼠的MEFs中过表达pLenti空载或pLenti-Flag-mUSP18,24小时后,加入SeV感染6小时,收取细胞,在细胞裂解液中加入GST-K63-TUBE共孵育,之后加GST beads进行免疫沉淀,富集了 K63位泛素化修饰的蛋白,之后通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中MAVS的蛋白水平。结果显示,在Trim31+/+MEFs中过表达USP18,能够导致MAVS K63位泛素化水平增强,而在Trim31-/-MEFs中则没有变化。11.3 TRIM31敲除对USP18敲低减弱MAVS泛素化的影响分别在Trim31+/+和Trim31-/-小鼠的MEFs中转入对照siRNA和靶向Usp18基因的siRNA,48小时后加入SeV感染6小时,收取细胞,在细胞裂解液中加入GST-K63-TUBE共孵育,之后加GST beads进行免疫沉淀,富集了 K63位泛素化修饰的蛋白,之后通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中MAVS的蛋白水平。结果显示,在TRIM31存在的情况下敲低USP18可以降低MAVS K63位修饰的泛素化水平,但是在缺失TRIM31的情况下,敲低USP18就不能降低MAVS的泛素化水平。12.USP18对MAVS-3KR活化的调控12.1 USP18对MAVS-3KR泛素化的调控将野生型的 MAVS 和 MAVS-3KR（K10R、K311R 和 K461R）分别与 USP18、只有K63形式的泛素的质粒共同转染进HEK293T细胞中,24小时后收取细胞,用MAVS的标签抗体做IP实验,用Western Blot检测MAVS的泛素化水平。结果显示,与野生型的MAVS相比,USP18无法增强K10R、K311R和K461R三点突变的MAVS K63位泛素化水平。12.2构建MAVS KO HeLa细胞系首先将靶向人源MAVS基因的single guide RNA（sgRNA）设计好,然后将其构建到慢病毒表达载体plenticrispr V2中。在HEK293T细胞中将测序正确的plentiCrisprV2-MAVS sgRNA,与 pVSVG,PSPX2 共同过表达,转染比例为 4:3:2,进行慢病毒包装。用包装好的病毒感染HeLa细胞,6小时后换液加入完全培养基,培养48小时后加入适当浓度的嘌呤霉素（puro）进行筛选,筛选出敲除MAVS的单克隆细胞株,通过Western Blot检测MAVS的敲除效率,同时对测序结果进行比对,确定可敲除MAVS的克隆株。12.3 USP18对MAVS-3KR回补信号通路的作用在缺陷细胞系中回补野生型MAVS和MAVS-3KR质粒,24小时后加入SeV感染6小时,通过qPCR检测细胞中IFNB,CCL5和CXCL10的mRNA水平。结果显示,在缺陷细胞系中回补野生型MAVS后,USP18的敲低能够降低SeV感染引起的IFNB,CCL5和CXCL10的mRNA水平的升高,而回补MAVS-3KR则没有影响。13.USP18与TRIM31相互作用13.1 USP18与TRIM31相互作用在HEK293T细胞中过表达USP18和TRIM31,用USP18的标签抗体进行免疫共沉淀,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中TRIM31的蛋白水平。结果显示,USP18与TRIM31存在相互作用。13.2 USP18与TRIM31在细胞内共定位在HeLa细胞中过表达USP18和TRIM31,通过免疫荧光实验观察USP18和TRIM31在细胞内的定位情况。结果显示,USP18可以与TRIM31共定位。13.3 USP18对TR IM31稳定性的影响在HEK293T细胞中共转染USP18和TRIM31的质粒,通过Western Blot检测TRIM31的蛋白水平。结果显示,TRIM31的表达没有明显变化,说明USP18对TRIM31的稳定性没有影响。14.USP18、TRIM31和MAVS三者相互作用14.1 USP18、TRIM31和MAVS的外源相互作用在HEK293T细胞中过表达USP18,MAVS和TRIM31,用USP18的标签抗体进行免疫共沉淀,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中TRIM31和MAVS的蛋白水平。结果显示,TRIM31和MAVS均能与USP18相互作用。14.2 USP18、TRIM31和MAVS的内源相互作用在THP-1细胞中加入SeV感染,用USP18的抗体进行免疫共沉淀,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中TRIM31和MAVS的蛋白水平。结果显示,TRIM31和MAVS均能与USP18相互作用。15.USP18对MAVS和TRIM31在线粒体上相互作用的影响15.1 USP18敲除对TRIM31在线粒体上定位的影响在Usp18+/+和Usp18-/-MEFs中加入SeV感染后,分离出细胞的线粒体组分,通过Western Blot检测MAVS和TRIM31的蛋白水平。结果显示,随着SeV感染时间的增加,在Usp18+/+MEF细胞中TRIM31在线粒体上大量富集。然而,这种富集在Usp18-/-MEF细胞中明显降低。并且无论USP18的缺失与否,线粒体上MAVS的水平都没有受到影响。这说明USP18敲除影响TRIM31在线粒体上聚集。15.2 USP18过表达对MAVS和TR IM31相互作用的影响在HEK293T细胞中梯度过表达USP18以及MAVS和TRIM31,用MAVS的标签抗体进行免疫共沉淀,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中TRIM31的蛋白水平。结果显示,梯度过表达USP18可以增强MAVS和TRIM31之间的相互作用。15.3 USP18敲除对MAVS和TRIM31相互作用的影响在Usp18+/+和Usp18-/-MEFs中加入SeV感染后,用TRIM31的抗体进行免疫共沉淀,通过Western Blot检测免疫沉淀复合物中MAVS的蛋白水平。结果显示,USP18敲除可以降低MAVS和TRIM31之间的相互作用。15.4体外系统中USP18对MAVS泛素化的影响体外泛素化体系中加入El,E2泛素连接酶UbcH5a,Ub,HA-MAVS,E3泛素连接酶TRIM31,以及His-USP1 8,催化反应后,用MAVS的抗体做IP实验,通过Western Blot检测MAVS的泛素化水平。结果显示,在体外泛素化体系中加入USP18并不能提高TRIM31催化的MAVS的泛素化水平。这就证实USP18对MAVS泛素化的调控,以及对MAVS和TRIM31相互作用的促进是依赖线粒体的。结论在本研究中,我们使用Psort Wolf软件来预测可能定位在线粒体上的DUBs。软件显示有13个DUBs可能定位在线粒体上。有趣的是,本研究发现USP18可以显著促进MAVS的多聚泛素化。SeV感染后,USP18和MAVS之间的相互作用增强,表明USP18可能调控MAVS的活性。此外,USP18能够增强MAVS K63位修饰的泛素化以及多聚化。并且,PMs或MEFs中USP18的缺陷导致病毒感染后I型干扰素反应受损。更重要的是,USP18缺陷的小鼠更容易受到病毒感染。机制上,USP18对MAVS的影响不依赖于其酶活性,但是依赖TRIM31。病毒感染后,USP18对TRIM31从细胞质到线粒体的转位以及TRIM31和MAVS之间的相互作用是至关重要的。创新性1.此前的研究表明,USP18是I型干扰素信号的负向调控因子,它能够抑制JAK和IFNAR之间的相互作用。并且,Ⅰ型干扰素刺激后,USP18的缺失能够增强细胞的病毒抗能力。本研究发现了 USP18调控MAVS泛素化和聚集的新功能。2.USP18作为一个DUB,却能够增强MAVS的多聚泛素化。3.病毒感染后,USP18富集在线粒体上,并促进TRIM31从细胞质到线粒体的转位,以及TRIM31与MAVS之间的相互作用,从而增强TRIM31介导的K63位泛素化修饰,进而促进MAVS的聚集。