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目的：探讨端粒酶活性在温和灸延缓衰老中的作用及温和灸调节端粒酶活性延缓衰老的机理。
方法：
动物实验研究：将大鼠随机分为亚急性衰老模型组、艾灸Ⅰ组(温和灸肾俞穴2个月)、自然衰老组、艾灸Ⅱ组(温和灸肾俞穴20个月)、正常组。亚急性衰老模型,用D-半乳糖制备；自然衰老模型,大鼠在标准环境设施中正常饲养,待其自然进入衰老期。用ELISA方法检测大鼠组织端粒酶活性的变化,用原位杂交方法检测大鼠组织端粒酶TERT基因表达的变化。用原位杂交和免疫组化方法,检测大鼠组织Rb、P53、Bcl-2、PKC mRNA及蛋白表达的变化。
临床试验研究：选取60-75岁的老年人,随机分为艾灸治疗组、衰老对照组；并另设正常对照组,年龄为25-35岁的青年人。艾灸治疗组温和灸肾俞穴和关元穴,治疗3个月,用积分表法观察温和灸对老年人衰老症状的变化情况用流式细胞术检测老年人外周血单个核细胞Rb、P53与Bcl-2、PKC蛋白表达及细胞周期的变化。
结果：
动物实验研究：
1.(1)亚急性衰老模型组大鼠组织端粒酶活性显著低于正常组(P<0.01);艾灸I组大鼠组织端粒酶活性显著高于亚急性模型组(P<0.01),但未达到正常水平(与正常组比较P<0.01)。
自然衰老组大鼠组织端粒酶活性显著低于正常组(P<0.01);艾灸II组大鼠组织端粒酶活性显著高于自然衰老组(P<0.05),但未达到正常组水平(与正常组比较P<0.01)。
(2)亚急性衰老模型组大鼠组织端粒酶TERT基因阳性表达面积和阳性表达光密度均显著低于正常组(P<0.01);艾灸I组阳性表达面积显著高于亚急性模型组(P<0.01),但未达到正常水平(与正常组比较P<0.05)。
自然衰老组大鼠组织端粒酶TERT基因阳性表达面积和阳性表达光密度均显著低于正常组(P<0.01);艾灸II组阳性表达面积与阳性表达光密度均显著高于自然衰老组(P<0.01,P<0.05),但均未达到正常水平(与正常组比较P<0.05)。
2.(1)自然衰老组大鼠组织Rb,P53 mRNA及蛋白表达均显著高于正常组(P<0.01,P<0.05);艾灸II组大鼠组织Rb、P53 mRNA及蛋白表达均显著低于自然衰老组(P<0.01,P<0.05)。
(2)自然衰老组大鼠组织Bcl-2、PKC mRNA及蛋白表达均显著低于正常组(P<0.01);艾灸II组大鼠组织Bcl-2、PKC mRNA及蛋白表达均显著高于自然衰老组(P<0.01,P<0.05)。
临床试验研究：
1.艾灸治疗组老年人衰老症状积分明显低于衰老对照组(P<0.01),综合疗效、主症有效率均明显高于衰老对照组(P<0.01)。艾灸组治疗后积分明显低于治疗前(P<0.01)。艾灸治疗组主症有效率、总有效率及症状总积分,二个疗程均优于一个疗程(P<0.05,P<0.01)。
2.(1)衰老对照组老年人外周血单个核细胞Rb、P53蛋白阳性表达率均显著高于正常组青年人(P<0.01);艾灸治疗组老年人外周血单个核细胞Rb、P53蛋白阳性表达率均显著低于衰老对照组(P<0.01),但未降低到正常水平(与正常组比较P<0.01)。
(2)衰老对照组老年人外周血单个核细胞Bcl-2、PKC蛋白阳性表达率均显著低于正常组青年人(P<0.01);艾灸治疗组老年人外周血单个核细胞Bcl-2、PKC蛋白阳性表达率均显著高于衰老对照组(P<0.01),但均未达到正常水平(与正常组比较P<0.01)。
3.衰老对照组老年人外周血单个核细胞G0/G1期细胞比例明显高于正常组青年人(P<0.01),PI指数显著低于正常组(P<0.01);艾灸治疗组老年人外周血单个核细胞G0/G1期细胞比例明显低于衰老对照组(P<0.01),PI指数显著高于衰老对照组(P<0.01),但均未达到正常水平(与正常组比较P<0.01)。
结论：
1.亚急性衰老模型和自然衰老模型大鼠组织的端粒酶活性均显著降低,温和灸可调节亚急性衰老模型和自然衰老模型大鼠组织的端粒酶活性。提示,端粒酶活性降低是机体衰老发生发展的共同机理之一,调节衰老机体组织的端粒酶活性可能是温和灸延缓衰老的重要路径之一。 2.温和灸可抑制衰老机体Rb、P53表达,增强Bcl-2、PKC表达。提示,温和灸可能是通过调节Rb、P53、Bcl-2、PKC,影响端粒酶TERT基因表达,调节端粒酶活性,延缓衰老。
3.温和灸可使老年人外周血单个核细胞G0/G1期细胞比例降低,PI指数增高。提示,温和灸可能是通过降低G0/G1期细胞比例,升高PI指数,增加有丝分裂原的反应能力和合成DNA的能力,使细胞进入S期,调节端粒酶活性,从而发挥延缓细胞衰老的作用。