温郁金对脑卒中后抑郁大鼠影响的研究

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目的:  通过观察温郁金对脑卒中后抑郁(PSD)大鼠神经功能、行为学、海马区组织细胞形态结构、海马区神经干细胞再生,以及海马区水通道蛋白-4(AQP-4)表达的影响,探讨温郁金抗脑卒中后抑郁的作用及机制,为开发具有自主知识产权的、高效低毒的抗抑郁药物提供实验依据,为阐释中医“祛瘀生新”内涵提供研究基础。  方法:  将大鼠随机分为假手术组、脑卒中组、PSD组、温郁金低剂量组、温郁金高剂量组和氟西汀组,采用线栓法复制大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)局灶性脑缺血模型,然后加用慢性不可预见性温和刺激(CUMS)联合孤养法复制脑卒中后抑郁大鼠模型。从CUMS第1天开始灌胃给药21天,假手术组、脑卒中组和PSD组灌胃蒸馏水,温郁金低剂量组和温郁金高剂量组灌胃温郁金水提物(分别按生药量1.4g·Kg-1·d-1和2.8g·Kg-1·d-1),氟西汀组灌胃盐酸氟西汀(2.33mg·Kg-1·d-1)。在应激前、应激第7、14天及应激后4个时间点进行神经功能损伤评分,并记录大鼠体质量,计算体质量增长率;在造模前及应激后两个时间点测定大鼠蔗糖水偏嗜度、水平活动积分和垂直活动积分。在应激后每组随机选取5只大鼠腹腔注射BrdU(50mg·Kg-1·d-1×2d)进行增殖细胞标记;取大鼠病灶侧海马组织进行石蜡切片,采用HE染色观察大鼠海马区细胞形态结构变化,进行病理评分;运用BrdU和Nestin免疫组织化学法染色,观察海马区细胞增殖及神经干细胞再生情况;取5只大鼠病灶侧海马制备脑组织匀浆,运用ELISA法检测大鼠海马区APQ-4的表达。  结果:  (1)脑卒中造模后应激前和应激第7天,脑卒中组、PSD组、温郁金低剂量组、温郁金高剂量组和氟西汀组大鼠神经功能明显受损(P<0.01);应激后温郁金高剂量组大鼠神经功能评分明显低于PSD组(P<0.05)。  (2)应激后PSD组大鼠体质量增长率、蔗糖水偏嗜度、水平活动积分和垂直活动积分均显著低于脑卒中组(P<0.01);与PSD组比较,温郁金高剂量组大鼠体质量增长明显(P<0.01),糖水偏嗜度显著提高(P<0.01),水平活动(P<0.01)和垂直活动(P<0.01)增加。  (3)HE染色结果显示:PSD组大鼠海马区可见明显的神经细胞变性和间质水肿,并可见到噬神经现象,部分区域可见胶质细胞增生;温郁金高剂量组大鼠海马区神经细胞形态结构大多正常,少数神经细胞变性和噬神经现象,部分区域见间质水肿。温郁金高剂量组大鼠病理评分显著低于PSD组(P<0.01)。  (4)免疫组化检侧结果显示,温郁金高剂量组大鼠海马区BrdU阳性细胞数和Nestin阳性细胞数均显著高于PSD组(P<0.01),并且BrdU阳性细胞和Nestin阳性细胞表达具有相关性(r=0.913,P<0.001)。  (5)ELISA检测结果显示,PSD组大鼠海马区AQP-4表达显著高于脑卒中组(P<0.05),温郁金低剂量组、温郁金高剂量组大鼠海马区AQP-4表达显著低于脑卒中组和PSD组(P<0.05,P<0.01)。  结论:  (1)脑卒中后抑郁大鼠模型复制成功。  (2)温郁金可促进PSD大鼠神经功能的恢复。  (3)温郁金可促进PSD大鼠体质量增加,提高PSD大鼠对幸福事件的反应性、自发活动能力以及对新环境的探索能力,说明温郁金可以改善PSD大鼠健康状况和抑郁样行为。  (4)温郁金能减轻PSD大鼠海马神经元变性和凋亡,减轻脑水肿,具有促进PSD大鼠海马区神经干细胞增殖的作用,改善PSD。  (5)AQP-4参与了PSD的发生和神经干细胞的再生,AQP-4的高表达可能促使了PSD的发生,温郁金可通过下调PSD大鼠海马组织AQP-4的表达,增加大鼠海马区神经干细胞增殖,而发挥抗脑卒中后抑郁作用。
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